線粒體基因組Cytb基因多態(tài)性與2型糖尿病的相關(guān)性研究.pdf

1、目的： 1.研究浙江漢族人線粒體DNA中Cytb基因和劍橋標(biāo)準(zhǔn)序列(rCRS)的差異，篩查Cytb基因變異的位點，以分析是浙江漢族人的多態(tài)性位點還是引起2型糖尿病的突變位點。 2.探討線粒體Cytb基因變異與2型糖尿病主要臨床生化指標(biāo)及并發(fā)癥的相關(guān)性。 方法： 1.根據(jù)1999年WHO糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)，隨機(jī)選取浙江漢族人群中確診為T2DM的無血緣關(guān)系患者203名，對所有患者作常規(guī)生化指標(biāo)檢測并記錄基本臨床資

2、料。同時選取102例年齡、性別匹配無糖尿病家族史及口服葡萄糖耐量正常者的血液標(biāo)本作為對照。 2.提取全血基因組DNA，用特定的針對整個Cytb基因區(qū)域的兩對引物擴(kuò)增出PCR產(chǎn)物并純化。對PCR純化產(chǎn)物直接測序分析。 3.使用生物信息學(xué)軟件(DNAstar和Chromas)進(jìn)行比對分析，查找變異位點。借助生物信息學(xué)軟件ClustalX及蛋白相關(guān)數(shù)據(jù)庫，分析氨基酸變異情況和Cytb蛋白結(jié)構(gòu)，并結(jié)合統(tǒng)計學(xué)方法分析Cytb基因變

3、異與T2DM及其并發(fā)癥的相關(guān)性。 結(jié)果： 1.在203名T2DM散發(fā)患者Cytb基因中共檢測到76個變異位點，在正常對照組中檢測到46個變異位點。所有位點發(fā)生率在兩組間差異無顯著性。其中C14766T、A153266在研究對象中檢測到變異率均大于99％。 2.在T2DM組中的28個錯義變異中，24個變異位點導(dǎo)致了氨基酸性質(zhì)的改變。其中由非極性疏水性氨基酸轉(zhuǎn)變?yōu)闃O性中性氨基酸占多數(shù)，其次為由極性中性氨基酸轉(zhuǎn)變?yōu)榉菢O

4、性疏水性氨基酸。 3.Cytb基因變異率在T2DM患者中發(fā)生的頻率高于健康對照者，差異具有顯著性(P＜0.05)。 4.在T2DM患者中部分變異發(fā)生在保守的區(qū)域，其在20種哺乳動物中呈現(xiàn)高度保守，尤其是位點G15024A(Cys93Tyr)、G15119A(Ala125Thr)、C15409G(His221Gln)、G15497A(Gly251Ser)，這四個位點在健康對照組中未檢到。 5.變異位點T14783C

5、、G15043A、G15301A在肥胖組(BMI≥25kg/m2)的發(fā)生率高于非肥胖組(BMI＜25kg/m2)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。 6.變異位點T14783C、G15043A、G15301A在高血壓患者中發(fā)生率高于未并發(fā)高血壓患者，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。 結(jié)論： 1.Cytb基因是一個高變的基因片段，在T2DM患者和健康對照人群中表現(xiàn)出較高的變異率，其變異率在T2DM患者中發(fā)生的

6、頻率高于健康對照者，這些變異位點大多數(shù)為多態(tài)性位點。 2.C14766T、A15326G在研究對象中檢測到變異率均大于99％。是歐洲人群中少見的多態(tài)性位點，這兩個位點可成為中國人群mtDNA序列的參考位點和對來源于歐洲人群的劍橋參考序列的一個修正。 3.變異位點T14783C、G15043A、G15301A均有較高的發(fā)生率，且總是同時出現(xiàn)。這三個位點在肥胖和伴發(fā)高血壓的T2DM患者中發(fā)生率較高，表明某一單倍型(含T147