siRNA下調FMNL-2基因對原發(fā)性肝癌中MMP-2基因的表達影響.pdf

1、目的:
　　1、檢測基因FMNL-2、MMP-2在原發(fā)性肝癌組織中的表達情況,探討二者與肝癌臨床病理學特征的關系;
　　2、初步探索FMNL-2與MMP-2在調控肝癌細胞發(fā)生發(fā)展、侵襲轉移中可能的作用機制。
　　方法:
　　1、采用免疫組織化學染色MaxvisionTM法分別檢測100例原發(fā)性肝癌及對應癌旁肝組織中FMNL-2、MMP-2的蛋白表達,應用圖文分析軟件Image-Pro Plus6.0測定FMNL-

2、2和MMP-2的蛋白累積光密度值(IOD)并統(tǒng)計分析結果;
　　2、采用RT-PCR技術檢測FMNL-2及MMP-2在三株不同轉移潛能的人肝癌細胞株中的表達情況,篩選出高表達FMNL-2及MMP-2的肝癌細胞株;
　　3、采用siRNA瞬時轉染技術構建FMNL-2低表達的肝癌細胞株;
　　4、采用RT-PCR技術檢測FMNL-2下調后的肝癌細胞株中MMP-2的表達情況。
　　結果:
　　1、免疫組化實驗結果

3、:肝癌及癌旁肝組織中FMNL-2蛋白IOD值分別為90748.36±46276.91和39075.46±24763.12,MMP-2蛋白IOD值分別為87969.46±27131.77和59517.72±20218.23,兩組差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05);FMNL-2在伴肝硬化組中IOD值為47471.96±40273.54,明顯低于不伴肝硬化組(P<0.05);MMP-2在HBsAg陽性組中IOD值為77668.34±27682

4、.79,稍低于HBsAg陰性組(P<0.05),在有轉移組中IOD值為63854.73±21730.42,稍低于無轉移組(P<0.05);肝癌組織中FMNL-2和MMP-2蛋白表達呈正相關(r=0.240,P=0.016)。
　　2、RT-PCR實驗結果:FMNL-2在MHCC-97H、HepG2及QGY-7703細胞株內的mRNA相對表達水平分別為(1.19±0.12)、(0.95±0.26)和(0.54±0.09),MMP-2

5、在三株細胞株內的mRNA相對表達水平分別為(0.78±0.20)、(0.34±0.05)和(0.21±0.03);MHCC-97H肝癌細胞中FMNL-2、MMP-2的mRNA表達明顯強于HepG2、QGY-7703中的表達;siRNA下調MHCC-97H細胞中的FMNL-2表達后,正常對照組、陰性對照組和干擾組的FMNL-2 mRNA相對表達水平均值分別為(0.86±0.03)、(0.90±0.10)和(0.24±0.02),正常對照組

6、、陰性對照組和干擾組的MMP-2 mRNA相對表達水平均值分別為(1.44±0.04)、(1.17±0.05)和(0.31±0.01);干擾組的MMP-2 mRNA表達水平顯著低于正常對照組和陰性對照組(p<0.05);正常對照組與陰性對照組MMP-2 mRNA表達水平無明顯差異(p>0.05)。
　　結論:
　　1、與癌旁正常肝組織相比,肝癌組織中FMNL-2及MMP-2存在高表達,二者之間的表達呈正性相關。
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