幾種單基因遺傳病致病基因的突變和功能研究.pdf

1、人類疾病致病基因的發(fā)現(xiàn)為我們理解疾病發(fā)病機理的分子機制提供了很好的途徑。 尋找致病基因最常用的方法是定位克隆，現(xiàn)代生命科學領域最強有力的研究手段之一。 定位克隆在尋找人類致病基因方面已經取得了很大成功，超過30種心血管疾病的疾病基因都是通過定位克隆的方法發(fā)現(xiàn)的。 定位克隆同樣對醫(yī)學領域產生了革命性的影響，致病基因的發(fā)現(xiàn)不僅為理解疾病的分子機理和人類基因的功能提供了很好的幫助，而且為疾病診斷技術的發(fā)展和指導基因針對性治療做出了很大的貢獻，

2、致病基因的功能研究也將為理解疾病的發(fā)病機理和疾病的診斷提供理論基礎，并促進我們對基因的結構和功能的認識，本研究通過定位候選克隆的方法，在遺傳性牙本質發(fā)育不全、先天性眼外肌纖維化、長QT綜合癥（LQTS）等疾病的病人中發(fā)現(xiàn)了致病基因的多個突變，同時通過生物化學、分子生物學、細胞生物學方法，基因敲除小鼠動物模型對新的房顫致病基因進行了功能研究。 第一部分：II型牙本質發(fā)育不全致病基因新突變的發(fā)現(xiàn) 遺傳性牙本質缺陷分為兩種主要

3、類型：牙本質發(fā)育異常（I型和II型）和牙本質發(fā)育不全（I型、II型、III型）。 II型牙本質發(fā)育不全是最常見的一種牙本質缺陷疾病，以常染色體顯性方式遺傳。 到目前為止，DSPP基因是唯一一個被發(fā)現(xiàn)的牙本質發(fā)育不全的致病基因。 我們發(fā)現(xiàn)并鑒定了一個有四代成員的II型牙本質發(fā)育不全的中國人家系，家系共有18位成員，包括8個患者。 用DSPP基因兩側的微衛(wèi)星遺傳標記D4S1534和D4S414做連鎖分析發(fā)現(xiàn)，DSPP基因與疾病連鎖。家系中患

4、者的DSPP基因的5個外顯子包括內含子、外顯子的交界處直接測序，發(fā)現(xiàn)在DSPP基因的第一個外顯子有一個新的突變(c.49C→T，p.Pro17Ser)。 Pro17Ser突變是一個突變熱點，它是成熟的DSP蛋白的第二個氨基酸，第17位脯氨酸在進化上高度保守，家系中的所有患者都攜帶這個突變，但家系中的正常個體和100個正常對照個體不攜帶這個突變。 結果表明在這個家系中DSPP基因的Pro17Ser突變導致II型牙本質發(fā)育不全，我們的研究發(fā)

5、現(xiàn)了DSPP基因的一個新突變，拓展了對DSPP基因導致牙本質發(fā)育不全的認識。 第二部分：KIF21A基因的p.Arg954Trp突變引起中國人先天性眼外肌纖維化 I型先天性眼外肌纖維化(Congenital fibrosis of the extraocular muscles，CFEOM)是一種罕見的常染色體顯性遺傳的眼肌疾病，臨床上主要表現(xiàn)為動眼神經缺陷而引起的斜視。 在本研究中，我們鑒定了一個有四代病人的CFEOM

6、1家系，連鎖分析表明致病基因與染色體12q處的微衛(wèi)星標記 D12S85 緊密連鎖，最大Lod 值為2.1。 對D12S85附近的CFEOM1致病基因KIF21A進行突變檢測，在KIF21A基因第21個外顯子發(fā)現(xiàn)有一C→T的堿基替換，該變化引起KIF21A基因的第954位密碼子由精氨酸突變?yōu)樯彼幔琒SCP分析結果表明該家系中的所有患者都具有這一突變，而在家系中的所有正常人以及150個正常漢人對照中則不能檢測到這一改變。 我們的研究表明K

7、IF21A p.Arg954Trp突變是引起這一先天性眼外肌纖維化家系病人患病的致病原因。 第三部分：LQTS(LQTS)家系中KCNH2基因新突變和KCNH2 K897T多態(tài)保護效應的發(fā)現(xiàn) KCNH2導致長QT綜合癥（LQTS）最常見的鉀通道致病基因之一，LQTS是以心電圖上QTc的延長為特征并伴有猝死的一種心律失常疾病。 在散發(fā)的LQTS人群中，我們發(fā)現(xiàn)KCNH2一個新的突變2020insAG,在一個LQTS家系中，

8、我們發(fā)現(xiàn)KCNH2基因A490T突變與KCNH2基因的K897T單核苷酸多態(tài)共分離。 同時攜帶KCNH2 A490T突變與K897T單核苷酸多態(tài)的患者和攜帶KCNH2 R366X突變的LQTS患者都有心動過緩的癥狀。 有報道KCNH2 K897T單核苷酸多態(tài)對QTc有修飾作用(KCNH2 K897T單核苷酸多態(tài)影響QTc)，但是K897T是充當風險因子還是具有保護作用還有爭議。 我們發(fā)現(xiàn)在家系中，7個同時攜帶A490T突變和K897T的

9、T等位基因的患者比只攜帶A490T突變或A490P突變的患者有更短的QTc并有更輕的癥狀，這些結果表明KCNH2 K897T單核苷酸多態(tài)對QTc的延長起保護作用。 第四部分：核孔蛋白基因NUP155突變導致房顫 房顫是一種最常見的一種心律失常疾病，我們在以前的研究中通過全基因組連鎖分析發(fā)現(xiàn)一個新的房顫致病基因的位點位于染色體5p13。 通過對連鎖區(qū)域內的所有候選基因進行突變篩選，我們發(fā)現(xiàn)新的房顫致病基因是NUP155。

10、NUP155基因編碼一種分子量為155kDa的核孔蛋白，核孔蛋白是核孔復合物的一種重要成分。 我們研究發(fā)現(xiàn)，在這個房顫家系中，NUP155基因的的純合突變R391H與房顫共分離，進一步的細胞生物學研究發(fā)現(xiàn)R391H突變影響NUP155蛋白的核定位。 NUP155蛋白在小鼠的心房心肌細胞中大量表達。純合子的NUP155基因敲除小鼠死于胚胎發(fā)育的8.5天前，但是雜合子的NUP155基因敲除小鼠有房顫表型。 對人和小鼠的研究都表明NUP155