原因不明無菌性腦膜炎爆發(fā)的病原確定及其全基因序列分析.pdf

1、本課題通過問卷調(diào)查收集了此次腦膜炎爆發(fā)的基本資料，總結(jié)了流行概況。為明確病因，采集了204份來自于204例臨床確診為無菌性腦膜炎患者的腦脊液(CSF，cerebrospinalfluid)標(biāo)本，以及4份采自另外4例患者的糞便標(biāo)本。采用細(xì)胞培養(yǎng)法進(jìn)行病原分離。第一階段病原分離在傳代細(xì)胞系Vero(非洲綠猴腎細(xì)胞)和HEp-2(人喉癌細(xì)胞)中進(jìn)行，204份CSF無一例引起陽性細(xì)胞病變(CPE，cytophathiceffect)；繼而先后引

2、入兩種來源于人體胚胎的細(xì)胞系MRC-5(人胚肺細(xì)胞)和293(人胚腎細(xì)胞)進(jìn)行第二階段的病原分離，結(jié)果發(fā)現(xiàn)66份接種于MRC-5細(xì)胞系的CSF中有18份產(chǎn)生了典型腸道病毒樣細(xì)胞病變，4例糞便標(biāo)本在該細(xì)胞系上也均出現(xiàn)陽性反應(yīng)；而24份接種于293細(xì)胞系的CSF標(biāo)本則沒有檢測(cè)到CPE。對(duì)分離陽性毒株通過電鏡了解其外部形態(tài)。然后提取病毒RNA、利用腸道病毒5’端非編碼區(qū)的高保守性，以兩對(duì)腸道病毒通用引物引導(dǎo)的逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR，