康氏木霉的原生質(zhì)體誘變及玉米秸稈發(fā)酵酒精工藝研究.pdf

1、該文以玉米秸稈和麥麩為原料,以康氏木霉為出發(fā)菌株,對(duì)該菌株進(jìn)行了原生質(zhì)體誘變,建立了康氏木霉原生質(zhì)體誘變及選育的方法,測(cè)定了選育出的菌株的一些性質(zhì),改進(jìn)了纖維素鑒別培養(yǎng)基和纖維素濾紙酶活的測(cè)定方法,建立了一種由玉米秸桿發(fā)酵生產(chǎn)酒精的簡(jiǎn)易方法.以該實(shí)驗(yàn)室保藏的康氏木霉為出發(fā)菌株,將該菌株接種至玉米秸桿:麥麩為1:4的固體培養(yǎng)基中28℃培養(yǎng)32h,測(cè)得濾紙酶活為13.40±1.58μg/min·mL.將溶壁酶制成酶液,該康氏木霉在酶液的作用

2、下,3h后去壁形成原生質(zhì)體,原生質(zhì)體經(jīng)過(guò)紫外線誘變后,選育出40株菌株,經(jīng)過(guò)五代培養(yǎng)后,初篩得到七株菌,最后經(jīng)過(guò)復(fù)篩得到纖維素酶活較高的兩株菌ZHYl和ZHY2.ZHYl接種至秸桿:麥麩為l:4的固體培養(yǎng)基中28℃培養(yǎng)32h,測(cè)得ZHYl菌的濾紙酶活為36.76±1.54μg/min·mL.ZHY2接種至秸桿:麥麩為1:4的固體培養(yǎng)基中28℃培養(yǎng)32h,測(cè)得ZHY2菌的濾紙酶活為33.40±2.80μg/min·mL.經(jīng)過(guò)多重比較差異顯

3、著性分析,ZHYl和ZHY2的酶活高于出發(fā)菌株的酶活并與出菌株的酶活有極顯著(p<0.01)的差異.初篩培養(yǎng)基為(NH<,4>)<,2>SO<,4> 2g,MgSO<,4> 0.5g,K<,2>HPO<,4> lg,NaCl 0.5g,纖維素粉2 g,剛果紅0.4g,瓊脂22g,水1000mL,自然pH值(纖維素粉以0.1mol/l的鹽酸處理24h,之后水洗至pH值中性,過(guò)濾、烘干.瓊脂則經(jīng)流水沖洗24h后烘干).與兩種對(duì)照培養(yǎng)基相比,

4、此培養(yǎng)基水解圈效果更明顯,根據(jù)水解圈沉淀大小,出現(xiàn)早遲便可粗略估計(jì)菌株產(chǎn)酶情況.在測(cè)定纖維素濾紙酶活的過(guò)程中的酶液浸提的方法為浸提時(shí)在搖床上30℃浸提1h,搖床轉(zhuǎn)數(shù)為95r/min.這樣可較充分的浸提出纖維素酶,與報(bào)道方法相比酶活測(cè)定結(jié)果可以更加準(zhǔn)確.在玉米秸桿生產(chǎn)酒精工藝方面,通過(guò)正交實(shí)驗(yàn),建立了一種直接將菌種用于分解纖維素再發(fā)酵產(chǎn)生酒精的方法,該法可用于實(shí)驗(yàn)室中秸桿發(fā)酵的試驗(yàn).根據(jù)該實(shí)驗(yàn)結(jié)果每千克玉米秸桿和每4千克麥麩可生產(chǎn)158g