阿爾茨海默氏病患者腦組織及經(jīng)β-淀粉樣蛋白處理的神經(jīng)細(xì)胞中炎癥因子的改變.pdf

1、目的：通過(guò)檢測(cè)阿爾茨海默氏?。ˋlzheimer Disease,AD）患者腦組織及經(jīng)β-淀粉樣蛋白（β-Amyloid peptide，Aβ）處理的人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞（Neuroblastoma cell，SH-SY5Y）中核轉(zhuǎn)錄因子（Nuclear Factor,NF）-κBp65、炎癥趨化因子單核細(xì)胞趨化蛋白1（Monocyte chemoattractant protein1，MCP-1/CCL-2）及巨噬細(xì)胞炎性蛋白-1α（M

2、acrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α/CCL-3）的表達(dá)，檢測(cè)不同聚集形式Aβ對(duì)神經(jīng)型尼古丁乙酰膽堿能受體（Neuronalnicotinic acetylcholine receptors，nAChRs）及炎性因子表達(dá)改變的影響等，來(lái)探討炎性因子在AD發(fā)病機(jī)制中的作用和神經(jīng)尼古丁乙酰膽堿受體的抗炎效果。
　　方法：選擇10例 AD患者及8例對(duì)照組成年人腦組織，用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)海馬

3、結(jié)構(gòu)、額葉及顳葉皮質(zhì)中 NF-κBp65、MCP-1、MIP-1α、GFAP等細(xì)胞因子的表達(dá)，用免疫組化雙染色方法檢測(cè) GFAP和Aβ的同步表達(dá)、用熒光免疫方法檢測(cè)不同類(lèi)型 Aβ表達(dá)；用 Aβ1-42處理體外培養(yǎng)的SH-SY5Y細(xì)胞，采用Western blotting，Elisa及Real-time PCR方法分別檢測(cè)細(xì)胞中 NF-κBp65、MCP-1、MIP-1α的蛋白及 mRNA表達(dá)水平；用不同聚集形式的Aβ處理 SH-SY5Y

4、細(xì)胞后測(cè)定 nAChRα3和α7亞單位及炎性因子 TNF-α、MCP-1和MIP-1α蛋白的表達(dá)。用 Aβ處理α3 nAChRmRNA沉默后的SH-SY5Y細(xì)胞，然后用Western blotting，Elisa及Real-time PCR檢測(cè)各組細(xì)胞中NF-κBp65和TNF-α、MCP-1、MIP-1α的蛋白及 mRNA表達(dá)情況。
　　結(jié)果：與對(duì)照組相比，AD患者腦組織海馬齒狀回、CA1-4各區(qū)、額葉皮質(zhì)、顳葉皮質(zhì)等部位均顯示

5、神經(jīng)細(xì)胞中 NF-κBp65表達(dá)明顯增高（P<0.05）；MCP-1及 MIP-1α在神經(jīng)細(xì)胞及膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)均增多（P<0.05）；GFAP顯示的神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)增多（P<0.05）并大量聚集在老年斑周?chē)?。?jīng) Aβ處理的SH-SY5Y細(xì)胞中 NF-κBp65、MCP-1、MIP-1α蛋白及 mRNA表達(dá)水平均增高（P<0.05）。相關(guān)系數(shù)分析表明，在 AD人腦組織中 MCP-1、MIP-1α蛋白水平與 NF-κBp65的改變有關(guān)。<

6、br>　　AβOs主要在神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，齒狀回顆粒細(xì)胞、海馬 CA1-CA4錐體細(xì)胞及內(nèi)嗅區(qū)皮質(zhì)各層神經(jīng)元胞體及突起內(nèi)均見(jiàn)棕黃顆粒狀陽(yáng)性表達(dá)，此外，小血管壁也見(jiàn)到 AβOs陽(yáng)性表達(dá)。AD患者及老齡對(duì)照者海馬結(jié)構(gòu)中均見(jiàn) AβOs陽(yáng)性表達(dá)。與老齡對(duì)照者相比，AD患者海馬各區(qū)錐體細(xì)胞及內(nèi)嗅區(qū)皮質(zhì)各層神經(jīng)元 AβOs表達(dá)明顯增強(qiáng)（P<0.05，P<0.01）。
　　采用1μmol/L濃度的Aβ1-42單體、纖絲體及寡聚體處理SH-SY5Y

7、細(xì)胞48小時(shí)后與對(duì)照組相比，Aβ寡聚體處理組α3、α7nAChRs蛋白表達(dá)水平明顯降低，炎性因子明顯升高（P<0.05）。
　　與對(duì)照組相比較，Aβ1-42使α3 nAChR siRNA處理后的SH-SY5Y細(xì)胞中 NF-κBp65、TNF-α蛋白及 mRNA表達(dá)水平明顯增加（P<0.05） MCP-1、MIP-1α蛋白及 mRNA表達(dá)水平未見(jiàn)明顯改變。
　　結(jié)論：AD發(fā)病中，Aβ可引起腦組織和培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞中炎癥因子表達(dá)增