TIMP-2基因轉(zhuǎn)染豚鼠鞏膜成纖維細胞基質(zhì)金屬蛋白酶2及其抑制劑的表達.pdf

1、目的：本研究通過構建攜帶基質(zhì)金屬蛋白酶2特異性組織抑制劑(tissueinhibitor of matrix metalloproteinase-2，TIMP-2)基因的真核表達載體，轉(zhuǎn)染豚鼠鞏膜成纖維細胞，觀察其基質(zhì)金屬蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2，MMP-2)及TIMP-2的表達，以探討形覺剝奪性近視基因治療的可行性，為尋找有效的預防和控制近視發(fā)展的方法提供依據(jù)。 方法：隨機選取三色健康豚鼠

2、，雌雄兼有，組織塊方法體外培養(yǎng)原代鞏膜成纖維細胞，免疫組織化學法進行波形蛋白的鑒定，取3-6代細胞進行實驗。分子克隆構建攜帶TIMP-2基因的真核表達載體，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染豚鼠鞏膜成纖維細胞12h、24h、48h、3d、5d、7d。采用MTT方法觀察轉(zhuǎn)染后細胞增殖能力，提取總RNA，二步法逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應檢測MMP-2mRNA及TIMP-2mRNA的表達水平。 結果：豚鼠鞏膜成纖維細胞原代、傳代培養(yǎng)生長良好，波形蛋白鑒定陽性。轉(zhuǎn)染

3、組與對照組比較轉(zhuǎn)染TIMP-2基因?qū)﹄嗍箪柲こ衫w維細胞有促增生作用。轉(zhuǎn)染48hMMP-2 mRNA表達即開始減少，轉(zhuǎn)染3d時表達明顯減少達到高峰，轉(zhuǎn)染5d-7d雖然減少但幅度較前降低，除轉(zhuǎn)染12h與24h之間外，各轉(zhuǎn)染組間MMP-2 mRNA表達差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。轉(zhuǎn)染48h時TIMP-2 mRNA表達即開始增加，轉(zhuǎn)染3d時表達明顯增加，轉(zhuǎn)染5d-7d時表達繼續(xù)增加，但增加的速率較前面降低，除轉(zhuǎn)染12h與轉(zhuǎn)染24h之間外，