喉癌組織中基質(zhì)金屬蛋白酶mmp┐2及其抑制劑timp┐2的表達(dá)

1、<p>　　喉癌組織中基質(zhì)金屬蛋白酶MMP┐2及其抑制劑TIMP┐2的表達(dá)</p><p>　　【關(guān)鍵詞】 喉腫瘤 </p><p>　　關(guān)鍵詞: 喉腫瘤;基質(zhì)金屬蛋白酶;免疫組化;淋巴轉(zhuǎn)移 </p><p>　　摘 要:目的 研究MMP-2及TIMP-2在喉癌組織中表達(dá)的情況及其臨床相關(guān)性. 方法 用免疫組化LSAB法檢測(cè)64例石蠟包埋的喉鱗癌組

2、織與5例正常喉粘膜組織石蠟標(biāo)本中MMP-2和TIMP-2的表達(dá). 結(jié)果 在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組與非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組MMP-2的陽性表達(dá)率分別為74%和39%，TIMP-2的陽性表達(dá)分別為52%和24%，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析二者的χ2 值分別是7.1800（P&lt;0.05），5.0420（P&lt;0.05），表明明顯相關(guān).而MMP-2與TIMP-2的陽性表達(dá)率與喉癌的部位、分化程度、臨床分級(jí)、病理分級(jí)均無明顯相關(guān). 結(jié)論 檢測(cè)MMP

3、-2和TIMP-2的表達(dá)對(duì)喉鱗癌的診斷和預(yù)后有一定的參考價(jià)值. </p><p>　　Keywords:laryngeal neoplasms;matrix metalloproteinase;immunohistochemical;lymphatic metastasis </p><p>　　Abstract:AIM To study the expressions of matrix

4、 metallo-proteinase-2and tissue inhibitor of metalloproteinase-2in hu-man laryngeal squamous cancer and the relationship between the expressions and clinical features.METHODS MMP-2and TIMP-2were examined with immunohisto

5、chemical　SAB method in the paraffinembedded specimens from64cases with laryngeal squamous cell carcinoma（LSCC）and5normals who served as the contol.RESULTS In the group of cervical lymphnode involvement and non-cervical l

6、ymphn-ode inv</p><p><b>　　0 引言 </b></p><p>　　基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）通過對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)（extracell matrix，ECM）的降解而促進(jìn)癌細(xì)胞對(duì)周圍組織的浸潤(rùn);其抑制劑，基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子（tissue inhibitor of metallotein

7、ases，TIMPs）則通過下調(diào)金屬蛋白酶的活性而抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移［1，2］ .MMPs及TIMPs在喉鱗癌中表達(dá)的研究報(bào)道甚少.為了探討MMPS及TIMPS在喉癌組織中的作用，我們采用免疫組化的方法，檢測(cè)64例喉鱗狀細(xì)胞癌組織中MMP-2及TIMP-2的表達(dá)情況，分析喉癌在不同的生長(zhǎng)部位、不同的臨床分期、不同病理分級(jí)、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等各種情況下二者的陽性表達(dá)率，再經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)處理后探討其臨床相關(guān)性. </p>&

8、lt;p><b>　　1 材料和方法 </b></p><p>　　1.1 材料 山西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院耳鼻咽喉科1997/1999年活檢或手術(shù)切除的經(jīng)病理證實(shí)為鱗狀細(xì)胞癌64（男53，女11）例，年齡41～75歲，術(shù)前未作過放療和化療.聲門上型14例，聲門型29例，混合型21例.按細(xì)胞分化程度分為:I級(jí)18例，II級(jí)33例，III級(jí)13例.經(jīng)臨床及頸清掃術(shù)證實(shí)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的23例

9、，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的41例.按1987年頒布的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，T1 ～T2 級(jí)43例，T3 ～T4 期級(jí)21例.5例正常喉粘膜取自尸檢患者，所有標(biāo)本均經(jīng)40g&#12539;L-1 甲醛固定，石蠟包埋.所用試劑均由福州邁新公司提供，喉癌組織為石蠟包埋的存檔蠟塊. </p><p>　　1.2 方法 連續(xù)4μm切片，正常喉粘膜標(biāo)本經(jīng)石蠟包埋，再作連續(xù)4μm切片.石蠟切片脫蠟至水.在30mL&#12539;L

10、-1 H2 O2 中浸泡10min，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性.PBS洗5min×3.抗原修復(fù):檢測(cè)MMP-2用40g&#12539;L-1 胃蛋白酶消化，37℃條件40min;檢測(cè)TMP-2為枸櫞酸鹽熱修復(fù)10min，90℃～98℃條件.PBS沖洗5min×3.100mL&#12539;L-1 的正常山羊血清封閉，37℃孵育10min，傾去血清，滴加1∶100的MMP-2mAb或1∶100的TIMP

11、-2mAb，4℃過夜，PBS沖洗5min×3，滴加1∶100的抗體37℃，孵育30min，PBS沖洗5min×3，滴加1:100的辣根酶標(biāo)記鏈霉素卵白素，37℃孵育30min，PBS沖洗5min×3，DAB染色20min，蘇木素復(fù)染.封片.免疫組化陽性信號(hào)顯示為棕黃色顆粒，選取5個(gè)有代表性不重疊的高倍視野，計(jì)算棕黃色顆粒所占的面積百分比，平均面積百分比&lt;10%為陰性，&gt;10%為陽

12、性. </p><p>　　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:采用χ2 檢驗(yàn)［3］ . </p><p><b>　　2 結(jié)果 </b></p><p>　　正常喉粘膜組織中末見有MMP-2及TIMP-2表達(dá).在喉癌組織中，MMP-2主要表達(dá)于癌巢周邊的細(xì)胞，癌巢周邊的基質(zhì)，癌周浸潤(rùn)的單核細(xì)胞，基質(zhì)細(xì)胞，血管內(nèi)皮細(xì)胞，TIMP-2主要表達(dá)于癌巢周邊基質(zhì)及個(gè)別癌細(xì)胞（

13、Fig1）. </p><p><b>　　圖1 略 </b></p><p>　　表1 喉癌組織中MMP-2和TIMP-2的陽性表達(dá)　略 </p><p><b>　　3 討論 </b></p><p>　　基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）活性異常有利于腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移［4］ .惡性腫瘤通過附著、基質(zhì)溶

14、解及移動(dòng)3個(gè)連續(xù)重復(fù)的過程使基質(zhì)受到侵襲、破壞.基底膜是由IV型膠原、糖蛋白、蛋白多糖等組成的厚實(shí)的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，IV型膠原是其主要支架.MMP-2是MMPs中的一種即明膠酶A，它可降解基底膜中的IV型膠原，從而破壞基底膜，有利于腫瘤的浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移.而基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子（TIMPs）則能與活化MMPs的結(jié)合抑制其活性，還能以共價(jià)健的形式與明膠酶原結(jié)合，從而抑制明膠酶的活性及其活化，TIMPs中的TIMP-1和TIMP-2都能與MMP-

15、2呈1∶1結(jié)合，且TIMP-2對(duì)MMP-2的抑制作用較TIMP-1強(qiáng)7～10倍以上，TIMP-2通過抑制MMP-2的活性抑制ECM的降解，從而抑制腫瘤的局部生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，阻止繼發(fā)灶的形成和限制腫瘤血管的形成，因此，腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移與TIMP-2及MMP-2均有關(guān). </p><p>　　MMP-2陽性表達(dá)說明癌組織對(duì)基底膜產(chǎn)生了降解、破壞并有新生血管的形成，腫瘤的持續(xù)生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移依賴于新生血管的形成［5］

16、 ，血管的形成是腫瘤迅速生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的必要條件，其形成可促進(jìn)腫瘤病灶的三維擴(kuò)散［6］ .在相應(yīng)部位TIMP-2表達(dá)率也增高，這是由于局部在受到腫瘤的刺激后可以產(chǎn)生更多的TIMP-2.在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組MMP-2，TIMP-2陽性表達(dá)率均高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組.MMP-2的陽性表達(dá)率分別為74%（17/23），39%（16/41）.TIMP-2的陽性表達(dá)率分別為52%（12/23），24%（10/41），并有顯著的病理學(xué)統(tǒng)計(jì)意義（P&lt;

17、0.05）.二者陽性表達(dá)率增高與喉癌淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān).這是由于TIMP-2增高的程度不足以抑制MMP-2的活性.MMP-2-TIMP-2失衡導(dǎo)致了基底膜的降解和腫瘤血管的形成，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移.由此可見MMP-2和TIMP-2是反映腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的指標(biāo). </p><p><b>　　參考文獻(xiàn): </b></p><p>　　［1］Xie YM，Nie QH，

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