Sinomenine對(duì)移植肝急性排斥反應(yīng)影響及CDFI、IBS對(duì)肝臟病理?yè)p害評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、肝移植已經(jīng)成為治療終末期肝病、急性肝衰竭的唯一有效的方法。臨床肝移植技術(shù)的發(fā)展有賴于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的研究，大鼠原位肝移植（OLT）模型由于其價(jià)格低廉、飼養(yǎng)管理便捷、操作簡(jiǎn)單、遺傳背景清晰等成為眾多實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的首選，是研究肝臟移植器官保存、缺血-再灌注損傷、血流動(dòng)力學(xué)、免疫抑制劑、移植排斥反應(yīng)及免疫耐受的理想動(dòng)物模型。經(jīng)過(guò)30多年中外學(xué)者的改進(jìn)，“二袖套法”成為廣泛采用的經(jīng)典術(shù)式。國(guó)內(nèi)由于鼠種、價(jià)格等諸多因素，廣泛選用SD與Wistar大鼠進(jìn)

2、行移植，認(rèn)為SD-Wistar是一組高排斥反應(yīng)的模型。 在肝移植治療方面盡管各種新的免疫抑制劑不斷問(wèn)世，但移植后的排斥反應(yīng)仍無(wú)法完全避免，誘導(dǎo)移植物抗原免疫耐受，成為解決器官移植排斥的根本方法。此外，免疫抑制劑和抑制方案仍存在不少弊端，尋找高效、低毒及價(jià)格低廉的免疫抑制藥物為臨床移植學(xué)界日益關(guān)注。青藤堿（SIN）是從防己科防己屬青風(fēng)藤中分離出的主要活性成分，分子式為C19H23NO4，具有鎮(zhèn)痛、抗炎等作用，臨床主要用于類風(fēng)濕的治

3、療，療效確切。近年來(lái)經(jīng)中、日等國(guó)學(xué)者的研究，青藤堿的免疫抑制作用受到高度重視。 在移植肝臟的病理診斷學(xué)方面，彩色多普勒是目前最為常用的影像診斷工具，應(yīng)用彩色多普勒可以對(duì)移植肝臟血流進(jìn)行監(jiān)測(cè)，了解血流動(dòng)力學(xué)變化，但由于二維圖像缺乏客觀性，影響了其對(duì)移植后排斥反應(yīng)的診斷價(jià)值。背向散射積分技術(shù)是近年發(fā)展起來(lái)的組織定征技術(shù)，與組織的病理改變有較好的相關(guān)性，有望成為又一重要的診斷技術(shù)。 本實(shí)驗(yàn)以大鼠原位肝移植為模型，探討青藤堿對(duì)大

4、鼠原位肝移植急性排斥反應(yīng)的作用機(jī)制，以及聯(lián)合環(huán)孢素A的治療效果，同時(shí)應(yīng)用彩色多普勒與背向散射積分技術(shù)監(jiān)測(cè)治療后大鼠肝臟的聲學(xué)特征，為青藤堿的臨床應(yīng)用和背向散射積分技術(shù)的術(shù)后監(jiān)測(cè)提供理論依據(jù)。 第一部分 大鼠肝移植模型的建立和術(shù)式改進(jìn) 目的：探討兩種改進(jìn)型大鼠肝移植手術(shù)術(shù)式對(duì)大鼠生存率的影響。 方法：經(jīng)典術(shù)式組建立SD-Wistar模型70例，改進(jìn)術(shù)式組35例，比較無(wú)肝期時(shí)間、肝上下腔靜脈吻合時(shí)間和大鼠一周生存率。

5、觀察經(jīng)典術(shù)式組大鼠的生存時(shí)間和肝臟病理改變。 結(jié)果：經(jīng)典術(shù)式組無(wú)肝期20．3±1．6min；吻合肝上下腔靜脈時(shí)間10．7±1．3min。改進(jìn)術(shù)式組無(wú)肝期26．7±4．1min；吻合肝上下腔靜脈時(shí)間15．1±1．7min。一周生存率，經(jīng)典術(shù)式組17．1%，改進(jìn)術(shù)式組91．4%。經(jīng)典手術(shù)組12只手術(shù)成功大鼠生存時(shí)間11-22天，平均為14．8±2．8天，大鼠死亡后肝臟病理表現(xiàn)為WilliamsⅢ級(jí)。 結(jié)論：SD-Wistar

6、大鼠原位肝移植模型是一組高排斥反應(yīng)模型。通過(guò)改進(jìn)肝上下腔靜脈離斷方式和門靜脈袖套制作技術(shù)，能夠提高大鼠血管吻合質(zhì)量。大鼠術(shù)后能否長(zhǎng)期存活的關(guān)鍵在于良好的肝上下腔靜脈、門靜脈吻合，吻合質(zhì)量較無(wú)肝期時(shí)間更為重要。 第二部分 青藤堿對(duì)大鼠原位肝移植急性排斥反應(yīng)影響的實(shí)驗(yàn)研究 目的：探討青藤堿、環(huán)孢素及兩者聯(lián)合應(yīng)用對(duì)大鼠肝移植模型排斥反應(yīng)的影響 方法：正常組：8只Wistar大鼠為空白對(duì)照。建立SD-Wistar OLT

7、模型，分為四組，對(duì)照組：8只未予藥物干預(yù)，CsA組：8只給予環(huán)孢素A30 mg/kg/d，SIN組：8只給予青藤堿40 mg/kg/d，CsA+SIN組：8只給予青藤堿40 mg/k9/d+環(huán)孢素15 mg/kg/d。檢測(cè)肝功、腎功變化，ELISA法比較各組血漿中IL-2、IL-10、sICAM-1情況，免疫組化法分析肝內(nèi)TGF-β1表達(dá)情況，RT-PCR法分析腎臟TGF-β1mRNA表達(dá)情況，TUNEL法分析肝臟內(nèi)淋巴細(xì)胞的凋亡情況，

8、HE染色分析肝臟的病理?yè)p害。 結(jié)果：①對(duì)照組肝臟功能損害最為明顯，谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶升高，總膽紅素升高、直接膽紅素明顯升高。各組間尿素氮和肌酐均無(wú)顯著性差異。②CsA組、SIN組、SIN+CsA組IL-2明顯低于對(duì)照組。③SIN、SIN+C sA明顯刺激IL-10分泌，CsA無(wú)明顯作用。④對(duì)照組sICAM-1明顯高于其他四組，隨著損傷程度減輕sICAM-1呈下降趨勢(shì)。⑤各組肝臟表達(dá)的TGF-β1蛋白和腎臟TGF-β1 mRN

9、A表達(dá)均有顯著性差異，并CsA組表達(dá)最高。⑥移植后肝內(nèi)匯管區(qū)淋巴細(xì)胞凋亡以SIN+CsA組最為明顯。⑦血漿sICAM與肝臟病理?yè)p害間呈正相關(guān)。 結(jié)論：①SIN能夠抑制促炎性因子IL-2、sICAM-1的分泌，促進(jìn)抑炎性因子IL-10、TGF-β1的表達(dá)，抑制炎癥反應(yīng)；②SIN與CsA聯(lián)合作用能夠促進(jìn)匯管區(qū)的淋巴細(xì)胞凋亡，誘導(dǎo)免疫耐受的形成；⑨SIN與CsA聯(lián)合作用能減少CsA的用量，減輕腎臟纖維化因子TGF-β1的表達(dá)；④sIC

10、AM-1是監(jiān)測(cè)排斥反應(yīng)發(fā)生和評(píng)價(jià)抗排斥治療效果的可靠指標(biāo)。 第三部分 應(yīng)用彩色多普勒與背向散射積分技術(shù)對(duì)大鼠移植肝臟病理?yè)p害的評(píng)價(jià) 目的：應(yīng)用彩色多普勒與背向散射積分技術(shù)評(píng)價(jià)移植后大鼠肝臟病理?yè)p害和藥物的治療作用。 方法：正常組：8只Wistar為空白對(duì)照。建立SD-Wistar OLT模型，分為四組，對(duì)照組：8只未予藥物干預(yù)，CsA組：8只給予環(huán)孢素A30mg/kg/d，SIN組：8只給予青藤堿40 mg/kg

11、/d，CsA+SIN組：8只給予青藤堿40 mg/k9/d+環(huán)孢素15 mg/kg/d。術(shù)后4天、10天測(cè)量肝臟的IBS和門靜脈、下腔靜脈的血流速度，術(shù)后10天處死大鼠取肝臟組織行病理檢查。 結(jié)果：①門靜脈血流速度：術(shù)后4天對(duì)照組明顯低于各手術(shù)組，CsA組與SIN+CsA組速度顯著增快，SIN組輕度增快。術(shù)后10天血流速度普遍下降。CsA組與SIN+CsA組仍快于正常組，SIN組與正常組無(wú)差異。②IBS對(duì)比：術(shù)后4天對(duì)照組與SI