重組可溶性Fas偶聯(lián)PKC抑制劑對直腸癌8348細(xì)胞靶向殺傷作用的研究.pdf

1、目的：針對復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移直腸癌細(xì)胞膜分子靶點(diǎn)，探討可溶性Fas偶聯(lián)PKC抑制劑對直腸癌細(xì)胞的靶向殺傷作用。 方法：采用RT-PCR擴(kuò)增、克隆Fas胞外區(qū)，構(gòu)建真核表達(dá)載體pGEX-4T-1-sFas，采用GST融和蛋白純化法純化sFas。采用化學(xué)偶聯(lián)法連接sFas與PKC抑制劑CalphostinC。通過細(xì)胞抑制率測定(MTT法)檢測偶聯(lián)物對FasL陽性結(jié)直腸癌細(xì)胞的殺傷作用。 結(jié)果：擴(kuò)增、克隆Fas胞外區(qū)57lbp經(jīng)限制性酶

2、切和DNA序列測定證實(shí)無誤。轉(zhuǎn)化宿主菌BL21表達(dá)純化，經(jīng)WesternBlotting確認(rèn)sFas蛋白產(chǎn)物。將sFas與PKC抑制劑CalphostinC經(jīng)化學(xué)偶聯(lián)得到偶聯(lián)物sFas-CalphoStinC。利用PKC酶檢測系統(tǒng)檢測偶聯(lián)物具有抑制PKC酶活性作用。偶聯(lián)物對FasL表達(dá)陽性直腸癌細(xì)胞HR-8348癌細(xì)胞生長抑制率(39.04％)較FasL表達(dá)陰性HR-8348癌細(xì)胞(33.69％)明顯提高(t=4.093，p＜0.05)