慢乙肝患者外周血Th17細(xì)胞與疾病相關(guān)性的研究.pdf

1、1.研究背景及目的:
　　 乙型肝炎病毒(HBV)感染是全球性的健康問(wèn)題。全世界大約有3.5—4億的慢性乙型肝炎病毒(CHB)患者,并且每年估計(jì)有1百萬(wàn)人死于由慢乙肝引起的肝硬化,肝衰竭和肝癌。目前已知,一旦HBV病毒感染人體,機(jī)體需要體液免疫和細(xì)胞免疫協(xié)同作用來(lái)清除病毒。其中,細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng),尤其是病毒特異性的CD4+和CD8+T細(xì)胞反應(yīng),是清除HBV感染的關(guān)鍵。Th17細(xì)胞作為最近新發(fā)現(xiàn)的一種CD4+的T輔助細(xì)胞,在自身

2、免疫性疾病和介導(dǎo)宿主抵御各種感染性的疾病中能夠發(fā)揮重要的作用。然而,Th17細(xì)胞在慢性HBV感染中的作用,尚不十分明確。
　　 本次研究的目的是對(duì)不同階段HBV感染患者外周血Th17細(xì)胞的數(shù)量進(jìn)行分析,研究其與肝功能損傷、HBV病毒復(fù)制以及細(xì)胞免疫耐受相關(guān)指標(biāo)的相關(guān)性,并進(jìn)一步探討Th17細(xì)胞在干預(yù)慢性HBV感染的病理過(guò)程及預(yù)后中的作用。
　　 2.材料與方法:
　　 2.1研究對(duì)象
　　 本研究人群共1

3、33人,其中包括40例輕度慢乙肝患者,37例重度慢乙肝患者,20例急性乙肝(AHB)患者,同時(shí)選取健康成人36人(無(wú)特殊病史,體檢無(wú)異常發(fā)現(xiàn),近2個(gè)月無(wú)感染病史)作為對(duì)照(HBV未感染組)。乙肝患者的診斷及分期標(biāo)準(zhǔn)按照2000年9月西安第十次全國(guó)傳染病工寄生蟲(chóng)病學(xué)會(huì)會(huì)議修訂的《病毒性肝炎防治方案》。
　　 2.2實(shí)驗(yàn)方法
　　 2.2.1 Th17細(xì)胞的檢測(cè):
　　 采用流式細(xì)胞術(shù)細(xì)胞內(nèi)因子染色法(流式細(xì)胞儀Ba

4、ckman CoulterFC500MPL)檢測(cè)AHB組、CHB組和健康對(duì)照組人群外周血CD4+T細(xì)胞中Th17細(xì)胞的數(shù)量。
　　 2.2.2病毒學(xué)指標(biāo)的檢測(cè):
　　 HBsAg,HBeAg,anti-HBs,anti-HBc,anti—HBe,以及HCV,HDV,HIV-1,和HIV-2使用時(shí)間熒光酶聯(lián)免疫分析試劑盒完成(AXSYM System,Abbott,Wiesbaden,Germany)。
　　 2.

5、2.3實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)RORγt-mRNA和HBV-DNA:
　　 采用美國(guó)ABI公司生產(chǎn)的7900型擴(kuò)增儀,分別按照各自的試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟檢測(cè)。
　　 2.2.4血清IL-10和IL-22檢測(cè):
　　 使用酶聯(lián)免疫分析法(ELISA)根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)操作(R&D公司),實(shí)驗(yàn)結(jié)果使用伯樂(lè)680型酶標(biāo)儀讀取。
　　 2.2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:
　　 應(yīng)用SPSS12.0軟件對(duì)不用類型的組別進(jìn)行Krus

6、kal-Wallis H檢驗(yàn)和Mann-whitney非參數(shù)U檢驗(yàn),使用Spearman發(fā)對(duì)Th17細(xì)胞和其他相關(guān)的參數(shù)進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　 3.結(jié)果:
　　 1、AHB組(95％CI2.24～2.92)和重度CHB組(95％CI2.20～2.64)患者外周血Th17細(xì)胞的數(shù)量與健康對(duì)照組(95％CI1.78～2.25)和輕度CHB組(95％CI1.69～2.19)比較明顯增高。(P<0.05)
　　 2、與健

7、康對(duì)照組相比較,AHB組和CHB組患者外周血PBMC中Th17細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子RORγt-mRNA的表達(dá)明顯升高(P<0.05)。
　　 3、CHB患者外周血Th17細(xì)胞的數(shù)量與血清中ALT的濃度呈正相關(guān)(r=0.457,P＝0.004),但是與HBV-DNA的載量無(wú)相關(guān)性(r=-0.063.P=0.598)。
　　 4、CHB患者外周血Th17細(xì)胞的數(shù)量與血清中IL-10的含量呈負(fù)相關(guān)(r=-0.452,P<0.05)。血

8、清IL-22的檢測(cè)結(jié)果在各組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 4.結(jié)論:
　　 1、我們的研究證實(shí),我們的結(jié)果證實(shí)在SCHB和AHB患者外周血的Th17細(xì)胞分化異常,并且參與了疾病的發(fā)生發(fā)展和肝臟病理?yè)p傷的過(guò)程。
　　 2、本次研究的結(jié)果提示慢乙肝患者Th17細(xì)胞的分化異常但并沒(méi)有影響HBV病毒的復(fù)制。
　　 3、慢乙肝患者Th17細(xì)胞的分化異常繼而通過(guò)加重以IL-17及IL-10為代表的機(jī)體促炎／抑炎免疫失衡狀