慢乙肝患者外周血Th17細胞與疾病相關(guān)性的研究.pdf

1、1.研究背景及目的:
　　 乙型肝炎病毒(HBV)感染是全球性的健康問題。全世界大約有3.5—4億的慢性乙型肝炎病毒(CHB)患者,并且每年估計有1百萬人死于由慢乙肝引起的肝硬化,肝衰竭和肝癌。目前已知,一旦HBV病毒感染人體,機體需要體液免疫和細胞免疫協(xié)同作用來清除病毒。其中,細胞介導的免疫反應,尤其是病毒特異性的CD4+和CD8+T細胞反應,是清除HBV感染的關(guān)鍵。Th17細胞作為最近新發(fā)現(xiàn)的一種CD4+的T輔助細胞,在自身

2、免疫性疾病和介導宿主抵御各種感染性的疾病中能夠發(fā)揮重要的作用。然而,Th17細胞在慢性HBV感染中的作用,尚不十分明確。
　　 本次研究的目的是對不同階段HBV感染患者外周血Th17細胞的數(shù)量進行分析,研究其與肝功能損傷、HBV病毒復制以及細胞免疫耐受相關(guān)指標的相關(guān)性,并進一步探討Th17細胞在干預慢性HBV感染的病理過程及預后中的作用。
　　 2.材料與方法:
　　 2.1研究對象
　　 本研究人群共1

3、33人,其中包括40例輕度慢乙肝患者,37例重度慢乙肝患者,20例急性乙肝(AHB)患者,同時選取健康成人36人(無特殊病史,體檢無異常發(fā)現(xiàn),近2個月無感染病史)作為對照(HBV未感染組)。乙肝患者的診斷及分期標準按照2000年9月西安第十次全國傳染病工寄生蟲病學會會議修訂的《病毒性肝炎防治方案》。
　　 2.2實驗方法
　　 2.2.1 Th17細胞的檢測:
　　 采用流式細胞術(shù)細胞內(nèi)因子染色法(流式細胞儀Ba

4、ckman CoulterFC500MPL)檢測AHB組、CHB組和健康對照組人群外周血CD4+T細胞中Th17細胞的數(shù)量。
　　 2.2.2病毒學指標的檢測:
　　 HBsAg,HBeAg,anti-HBs,anti-HBc,anti—HBe,以及HCV,HDV,HIV-1,和HIV-2使用時間熒光酶聯(lián)免疫分析試劑盒完成(AXSYM System,Abbott,Wiesbaden,Germany)。
　　 2.

5、2.3實時定量PCR檢測RORγt-mRNA和HBV-DNA:
　　 采用美國ABI公司生產(chǎn)的7900型擴增儀,分別按照各自的試劑盒說明書步驟檢測。
　　 2.2.4血清IL-10和IL-22檢測:
　　 使用酶聯(lián)免疫分析法(ELISA)根據(jù)試劑盒說明書操作(R&D公司),實驗結(jié)果使用伯樂680型酶標儀讀取。
　　 2.2.5統(tǒng)計學分析:
　　 應用SPSS12.0軟件對不用類型的組別進行Krus

6、kal-Wallis H檢驗和Mann-whitney非參數(shù)U檢驗,使用Spearman發(fā)對Th17細胞和其他相關(guān)的參數(shù)進行相關(guān)性分析。
　　 3.結(jié)果:
　　 1、AHB組(95％CI2.24～2.92)和重度CHB組(95％CI2.20～2.64)患者外周血Th17細胞的數(shù)量與健康對照組(95％CI1.78～2.25)和輕度CHB組(95％CI1.69～2.19)比較明顯增高。(P<0.05)
　　 2、與健

7、康對照組相比較,AHB組和CHB組患者外周血PBMC中Th17細胞轉(zhuǎn)錄因子RORγt-mRNA的表達明顯升高(P<0.05)。
　　 3、CHB患者外周血Th17細胞的數(shù)量與血清中ALT的濃度呈正相關(guān)(r=0.457,P＝0.004),但是與HBV-DNA的載量無相關(guān)性(r=-0.063.P=0.598)。
　　 4、CHB患者外周血Th17細胞的數(shù)量與血清中IL-10的含量呈負相關(guān)(r=-0.452,P<0.05)。血

8、清IL-22的檢測結(jié)果在各組之間無統(tǒng)計學差異。
　　 4.結(jié)論:
　　 1、我們的研究證實,我們的結(jié)果證實在SCHB和AHB患者外周血的Th17細胞分化異常,并且參與了疾病的發(fā)生發(fā)展和肝臟病理損傷的過程。
　　 2、本次研究的結(jié)果提示慢乙肝患者Th17細胞的分化異常但并沒有影響HBV病毒的復制。
　　 3、慢乙肝患者Th17細胞的分化異常繼而通過加重以IL-17及IL-10為代表的機體促炎／抑炎免疫失衡狀