注射用重組人甲狀旁腺素（1-34）的Ⅰ期臨床試驗研究.pdf

1、甲狀旁腺激素（PTH）是一種可以刺激正常骨組織更新、代謝的激素，它可以增加骨密度，改善骨結(jié)構(gòu)。PTH 的這些功能使之成為臨床上治療骨質(zhì)疏松癥的一種有效藥物。注射用重組人甲狀旁腺素（1-34）是根據(jù)PTH 的cDNA 序列，將其克隆至大腸桿菌表達載體中，并在大腸桿菌中表達獲得的基因工程藥物。根據(jù)我國藥品食品監(jiān)督管理局（SFDA）通過的《藥品注冊管理辦法》，注射用重組人甲狀旁腺素（1-34）屬于生物制品7 類，即已在國外上市銷售但尚未在國內(nèi)

2、上市銷售的生物制品。 目的：建立免疫放射測定（IRMA）法測定人血漿中重組人甲狀旁腺素（1-34）濃度的方法，進行單次和多次給藥后重組人甲狀旁腺素（1-34）在健康人體內(nèi)的耐受性和藥代動力學(xué)研究，為指導(dǎo)臨床制定安全、合理的用藥方案提供理論依據(jù)，為新藥審批和臨床用藥提供試驗依據(jù)，并為Ⅱ期臨床研究提供參考依據(jù)。 方法：本研究分三部分。 第一部分建立靈敏度高、專一性強、準(zhǔn)確性好、重復(fù)性強的IRMA 法測定人血漿中rhP

3、TH(1-34)的分析方法學(xué)。 測定步驟：先將待測樣品200 μL 加入已標(biāo)記的試管，再加入100 μL125I 標(biāo)記的鼠PTH抗體至上述試管，旋渦震蕩，把試管架傾斜約30 度，用鑷子向每管中加入一?？贵w包被珠。用封口膜蓋住管口，室溫孵育18 至24 小時，吸去每管中的液體。再向每管中加入2 mL 洗滌液，洗滌三次并將液體吸凈。在伽瑪計數(shù)器上計數(shù)，記錄結(jié)果。每份樣品重復(fù)測定，各藥盒都設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線，用以計算未知樣品濃度。

4、第二部分考察單次和多次皮下注射rhPTH（1-34）（10～40μg）在健康受試者體內(nèi)的耐受性。 隨機選取40 名健康志愿者，年齡、體重、身高均符合試驗要求，常規(guī)體檢、心電圖檢查，實驗室檢查包括血、尿常規(guī)，肝、腎功能等各項生化檢查均無異常，無其它系統(tǒng)性疾病及藥物過敏史。3 個月內(nèi)未參加過臨床試驗，試驗前兩周內(nèi)及試驗期間未服用其他任何藥物。試驗中隨時觀察受試者癥狀、體征以及各種不良反應(yīng)，并定期進行實驗室檢查：血尿常規(guī)、肝腎功能、血

5、液生化及血液電解質(zhì)變化等。綜合評價rhPTH 在健康人體內(nèi)的耐受性，整個試驗期間配備有經(jīng)驗的醫(yī)師和護士監(jiān)護。所有計量資料均采用Excel 或SPSS 軟件進行計算，以?X ± SD 表示，并進行t 檢驗或方差分析。 第三部分研究單次和多次皮下注射rhPTH（1-34）（10～40μg）在健康受試者體內(nèi)的藥代動力學(xué)特征。 40 名健康受試者隨機平行分為低、中、高3個單次給藥劑量組和1 個連續(xù)給藥中劑量組。按實驗設(shè)計要求，4

6、0 名受試者于試驗前禁食12 h，次日晨給藥前采集靜脈血5mL，再分別單次和多次腹腔皮下注射rhPTH（1-34），于給藥后5，10，15，20，30，45，60，90，120，150，180，240min 采集靜脈血5mL，置于預(yù)先已經(jīng)貼好標(biāo)簽并含抗凝劑的試管內(nèi)(用15％ EDTA 抗凝)，3600 rpm 4℃離心分離血漿，每1mL 血漿樣品中加入48μL 混合蛋白酶抑制劑，-80℃凍存待測。本試驗采用IRMA 法測定血漿中rhPT

7、H（1-34）的濃度。采用Microcal 公司Origin 軟件計算主要藥代動力學(xué)參數(shù)，Tmax、Cmax 采用實測值，AUC 用統(tǒng)計矩方法計算。所有的數(shù)據(jù)均用幾何均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X ± SD）表示，采用單因素ANOVA 和Student’s t test進行統(tǒng)計學(xué)分析。 結(jié)果： 1. 40 名健康受試者，男20 名，女20 名，均完成試驗。單次給藥耐受性試驗觀察7 天，多次給藥耐受性試驗觀察14 天。試驗期間，全部試驗

8、的40名受試者應(yīng)用不同劑量藥物后均未有明顯的不良反應(yīng)發(fā)生；呼吸、心率、血壓、脈搏、體溫等生命體征未見異常；心電圖正常。注射藥物局部未發(fā)現(xiàn)皮膚紅腫、瘀斑或皮疹等刺激性反應(yīng)，試驗觀察期間未出現(xiàn)不適反應(yīng)和異常體征。 2. 單次皮下注射rhPTH(1-34)10、20 和40μg 后觀察至7 天，20μg 多次皮下注射rhPTH(1-34)后觀察至14 天。試驗前后進行兩次血液生化指標(biāo)檢查。40 名健康受試者用藥前后血液生化指標(biāo)檢查未發(fā)

9、現(xiàn)異常改變，經(jīng)t 檢驗，各指標(biāo)試驗前后比較均無顯著差異。試驗前后進行尿常規(guī)指標(biāo)檢測，所有健康受試者尿常規(guī)指標(biāo)無異常改變。 3. 本試驗采用IRMA 法測定健康志愿者血漿中rhPTH（1-34）濃度，最低檢測限為20pg·mL-1，線性范圍為25～2500pg·mL-1，在此線性范圍內(nèi)盒內(nèi)雙管的重現(xiàn)性好，CV％均小于10％，準(zhǔn)確度在-1.7％～2.8％之間；不同藥盒間批間精密度CV％ 也均小于10％，準(zhǔn)確度在-3.0％～4.4％之

10、間。 4. 單次皮下注射rhPTH（1-34）10、20 和40μg 后的藥代動力學(xué)參數(shù)：T1/2ke分別為47.7 ± 12.1、50.1 ± 16.4 和53.6 ± 14.4min；MRT 分別為56.3 ± 3.9、57.8± 11.9 和84.7 ± 9.3min；AUC(0-240) 分別為9786.9 ± 1456.3、15425.5 ± 1661.1和32716.2 ± 3158.0 pg·min·mL-1；Tm

11、ax 分別為32.5 ± 9.5m、24.0 ± 9.7 和35.0 ±13.5min；Cmax 分別為139.8 ± 36.3、203.9 ± 50.4 和295.8 ± 43.5pg·mL-1。7 天連續(xù)皮下注射rhPTH(1-34) 20μg 后的藥代動力學(xué)參數(shù)為：T1/2ke：50.9 ± 5.9min；AUC(0-240)：96955.8 ± 3076.3 pg·min·mL-1；Tmax：30.5 ± 11.9min；Cma

12、x：16955.8± 3076.3 pg·mL-1。 結(jié)論： 1. IRMA 的分析方法具有靈敏度較高，準(zhǔn)確性好，專一性較強，操作簡便快捷、可重復(fù)性強的特點。高低兩種濃度樣品-80℃凍存一個月后，PTH 穩(wěn)定性良好，與未經(jīng)凍存的樣本相比，統(tǒng)計學(xué)無顯著性差異。適用于人體血漿中rhPTH（1-34）的定量分析。 2. 試驗證明健康志愿者單次和多次皮下注射國產(chǎn)rhPTH（1-34）在10～40μg劑量范圍內(nèi)是安全的，不