皮膚微透析分析方法的構(gòu)建及外用制劑體內(nèi)經(jīng)皮吸收的藥代動力學(xué)研究.pdf

1、目的：系統(tǒng)或局部用藥后，藥物對靶點(diǎn)的藥效作用主要取決于藥物濃度和藥物與受體之間的親和力。其中藥物與受體之間的親和力由藥物的結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)決定，因此靶組織的藥物濃度是調(diào)節(jié)藥物藥效作用的主要手段。皮膚病皮損的治療可以通過系統(tǒng)用藥或局部用藥進(jìn)行，但針對皮損局部靶組織發(fā)揮藥理作用的兩種途徑的藥物需了解靶皮損內(nèi)的藥物濃度，一如作用于皮膚病的系統(tǒng)發(fā)病環(huán)節(jié)靶點(diǎn)需要了解血藥濃度一樣。因而皮內(nèi)藥物濃度不僅是皮損局部藥效作用重要的定量指標(biāo)，而且是進(jìn)行皮膚藥

2、代動力學(xué)研究的關(guān)鍵參數(shù)。以往的研究受研究方法和分析設(shè)備所限，很難準(zhǔn)確測定局部用藥后的皮內(nèi)藥物濃度。針對上述情況，首先建立小豬體內(nèi)皮膚微透析(Microdialysis，MD)取樣技術(shù)的動物模型，并對MD技術(shù)中的影響因素進(jìn)行考察；與傳統(tǒng)組織勻漿法相比較，評價MD方法用于監(jiān)測皮內(nèi)藥物濃度的實(shí)用性及替代性；同時實(shí)時監(jiān)測皮內(nèi)藥物濃度，對藥效作用作定量分析；并利用皮膚藥動學(xué)對制劑間生物等效性的應(yīng)用進(jìn)行探索；聯(lián)合體外實(shí)驗(yàn)，觀察藥物的體、內(nèi)外濃度一效

3、應(yīng)(毒性)關(guān)系，使新藥研究及臨床用藥研究水平提升到一個新的高度。 方法：選用小豬作為微透析模型，用高效液相色譜法(HPIC)測定相關(guān)樣品中的待測物濃度，并對HPIC條件進(jìn)行方法學(xué)考核。Ⅰ：以雷公藤內(nèi)酯醇(T<,0>)為實(shí)驗(yàn)被檢對象，在小豬為體內(nèi)實(shí)施MD取樣方法，建立模型，并考察實(shí)驗(yàn)的影響因素；Ⅱ：以MD方法連續(xù)、動態(tài)測定為基礎(chǔ)，比較局部使用EMIA和P-L軟膏兩種主藥相同、基質(zhì)成分不同的低共熔局部麻醉制劑后的皮內(nèi)實(shí)時藥物濃度，評

4、價MD技術(shù)在臨床前處方篩選和優(yōu)化研究中的應(yīng)用前景；Ⅲ：通過體外細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞病變效應(yīng)fcytopathic effect，CPE)法體外測定藥物的細(xì)胞毒性、MD方法監(jiān)測局部用藥后皮內(nèi)藥物濃度、組織勻漿法測定局部用藥后皮膚組織藥物濃度、動物連續(xù)局部用藥21天后皮膚組織病理學(xué)檢查等步驟，觀察藥物細(xì)胞毒作用的體內(nèi)、體外相關(guān)性和區(qū)別；Ⅳ：用體外溶出度實(shí)驗(yàn)分別測定三種生產(chǎn)商不同，但主藥、濃度和劑型都相同的制劑的體外釋放量，再用MD方法監(jiān)測三種制劑的

5、體內(nèi)藥物經(jīng)皮吸收量，觀察藥物體外釋放和體內(nèi)經(jīng)皮吸收對皮內(nèi)濃度的影響，進(jìn)而評價制劑間的生物等效性；Ⅴ：通過觀察制劑的體外藥物釋放、體內(nèi)經(jīng)皮吸收和皮膚組織藥物濃度測定，考察MD方法的局限性。 結(jié)果： Ⅰ：在微透析方法的眾多影響因素中，探針的灌流速度對實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響最大，探針的相對回收率與灌流速度之間存在反指數(shù)關(guān)系；回收率和溫度之間呈線性正相關(guān)；在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，探針回收率與周圍溶液濃度無相關(guān)性；對實(shí)驗(yàn)樣品雷公藤內(nèi)酯醇而言，不同

6、的回收率測定方法所得結(jié)果之間無顯著性差異； Ⅱ：外用實(shí)驗(yàn)制劑P-L軟膏后兩主成分利多卡因和丙胺卡因的經(jīng)皮吸收總量(以AUC<,0-6>為評價指標(biāo))分別為EMLA的2.32和2.29倍，而皮內(nèi)藥物達(dá)峰濃度(Cmax)分別為EMLA的2.77和2.64倍。外用EMIA后皮內(nèi)利多卡因和丙胺卡因的濃度分別在2.55h和2.47h達(dá)峰，而外用P-L軟膏后1h左右皮內(nèi)藥物濃度即可以達(dá)到上述水平； Ⅲ：體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中用CPE法測得

7、化合物HB-13對人角質(zhì)形成細(xì)胞HaCaT株的TC<,50>為24.03μg/mL；用微透析法測定0.5％HB-13凝膠經(jīng)皮吸收后的皮內(nèi)藥物濃度的結(jié)果表明局部用藥后皮內(nèi)穩(wěn)態(tài)藥物濃度約為2.3μg/mL；勻漿法測得皮膚組織內(nèi)的藥物濃度平均為26.32μg/mL。在此前提下，延長給藥時間至21天后觀察給藥部位皮膚的組織學(xué)變化的結(jié)果表明用藥部位皮膚組織學(xué)無病理改變； Ⅳ：濃度和劑型相同的三種阿昔洛韋(acyclovir，ACV)乳膏的

8、體外釋放過程均符合Higuchi動力學(xué)方程，累積釋放量Q與時間的平方根t<'1/2>擬合的線性最好，其中ACV乳膏2的體外釋放量最高，為856.96±56.98μg/cm<'2>，ACV乳膏1次之，為833.22±42.76μg/cm<'2>，ACV乳膏3最低，為637.98±71.8g/cm<'2>；上述三種ACV乳膏外用于局部皮膚后，ACV乳膏1的體內(nèi)經(jīng)皮吸收量最高，ACV乳膏2和ACV乳膏3的體內(nèi)經(jīng)皮吸收量之間無明顯差異。用ACV

9、乳膏2和3的藥代動力學(xué)參數(shù)進(jìn)行生物等效性評價，結(jié)果表明二者生物等效； Ⅴ：以醋酸曲安奈德(triamcinolone acetonide，TAA)為實(shí)驗(yàn)藥的體外實(shí)驗(yàn)中，微透析探針對TAA的回收率較低，且與傳遞率不相等(平均值分別為13.97％和36.03％)。實(shí)驗(yàn)所用兩種TAA制劑的藥物體外釋放和局部用藥后皮膚組織藥物濃度之間無明顯差異，用MD方法在透析液中不能檢測到TAA的藥物濃度。 結(jié)論：在建立MD方法的動物模型完成

10、并對實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化以后，可以用MD方法連續(xù)、微創(chuàng)、實(shí)時監(jiān)測局部用藥后的皮內(nèi)藥物濃度變化過程。在此基礎(chǔ)上，可用直接的皮內(nèi)藥物濃度-時間數(shù)據(jù)計(jì)算外用制劑的局部藥代動力學(xué)參數(shù)，進(jìn)而進(jìn)行制劑間生物等效性評價。MD方法在外用制劑的局部藥代動力學(xué)研究、臨床前處方篩選與優(yōu)化、藥物皮膚毒理濃度探索和外用制劑間生物等效性評價方面有良好的應(yīng)用前景。但是，和所有的實(shí)驗(yàn)方法一樣，MD方法也有方法學(xué)本身的局限性。探針對一部分脂溶性高、藥物蛋白結(jié)合率高和分子量大