體外溫熱刺激對神闕穴區(qū)血管內(nèi)皮細胞能量物質(zhì)代謝的研究.pdf

1、目的:探討適宜溫熱刺激對離體人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞(Human umbilicalvenousendothelial cells，HUVECs)的物理信號生物轉(zhuǎn)化作用，為神闕灸“感受刺激，防治疾病”的現(xiàn)代醫(yī)學生物學機制提供理論與實驗依據(jù)。
　　方法:運用靜脈灌注酶消化法對腧穴（神闕）-臍靜脈進行血管內(nèi)皮細胞的體外培養(yǎng)并建系，將細胞分為正常組(37℃)以及不同溫度刺激組(38℃、39℃、40℃、41℃、42℃、43℃組)，在恒溫水浴鍋

2、中用不同溫度刺激臍靜脈血管內(nèi)皮細胞，光鏡下觀察細胞形態(tài)變化，MTT觀察細胞生長活力，流式細胞儀檢測細胞增殖與凋亡，篩選出適宜的溫度刺激量（溫度和時間），用高效液相色譜檢測在適宜溫度刺激量作用下血管內(nèi)皮細胞ATP、ADP、AMP含量。
　　結(jié)果:①選擇溫度刺激范圍在38℃-43℃，刺激1次/日，30min/次，其中38℃-41℃組與正常組(37℃)相比較，無明顯細胞形態(tài)上的異常，而且在之后的繼續(xù)刺激下其細胞形態(tài)也無明顯改變。而42℃

3、、43℃組從第3天開始細胞出現(xiàn)腫脹，見少量細胞碎片，第6天開始出現(xiàn)大量細胞脫落、調(diào)亡。
　?、诖碳r間不同，對腧穴血管內(nèi)皮細胞的生長活力影響也不同;不同溫度、時間刺激對腧穴血管內(nèi)皮細胞生長活力有差異(P＜0.05)，而溫度起主要作用(P＜0.05);而且不同溫度組細胞生長活力隨著時間變化均有不同，至第8天生長活力下降，42℃組、43℃組生長活力明顯低于其他溫度組。
　　③適宜溫度刺激量（40℃、41℃，7-8天）與正常溫度組

4、（37℃組）比較，對腧穴血管內(nèi)皮細胞增殖率的影響有顯著不同，差異有顯著性和極顯著性（P＜0.05，或P＜0.01)，第8天40℃、41℃組與37℃組比較，增殖率顯著升高，差異有極顯著性(P＜0.01)。
　?、苓m宜溫度刺激量與正常溫度37℃組比較，對腧穴血管內(nèi)皮細胞凋亡率之間的差異有極顯著性(P＜0.01)，第8天40℃、41℃組與37℃組比較，凋亡率顯著升高，差異有極顯著性(P＜0.01)。
　?、葸m宜溫度刺激量對腧穴血管

5、內(nèi)皮細胞的能量物質(zhì)影響:40℃組刺激8d后ATP的含量較37℃組有所升高，但差異無顯著性(P＞0.05)，41℃組刺激8d后ATP的含量與37℃組比明顯增高，差異有顯著性(P＜0.05)。40℃、41℃組刺激8d后ADP的含量與37℃組比均有所升高，差異有極顯著性和極其顯著性(P＜0.05，或P＜0.001)，41℃組優(yōu)于40℃組(P＜0.05)。40℃、41℃組刺激8d后AMP的含量均有所升高，與37℃組比、41℃差異有極其顯著性(P

6、＜0.01)，41℃組優(yōu)于40℃，無顯著性(P＞0.05)。
　　結(jié)論:(1)實驗中所采用的體外模擬艾灸的溫度刺激，一定條件下對臍靜脈血管內(nèi)皮細胞可產(chǎn)生明顯影響;經(jīng)過給予不同的溫度刺激，用流式細胞儀觀察細胞增殖和凋亡情況，篩選出適宜溫度刺激量，刺激溫度40℃、41℃時間為7、8d。
　　(2)觀察神闕穴區(qū)血管內(nèi)皮細胞接受適宜的溫度和時間刺激后生物學行為的變化。適宜溫度刺激量能夠提高ATP、ADP、AMP的量以及ADP/ATP