食管鱗癌候選擴增癌基因研究.pdf

1、本文從基因擴增的角度出發(fā)，在實驗室前期進行的食管癌細胞遺傳學和分子遺傳學研究以及文獻報道的基礎上，從擴增發(fā)生頻率較高的染色體區(qū)段1 q、3q、8q和11q中尋找與食管癌發(fā)生發(fā)展有關的擴增基因。 首先挑選30個可能與腫瘤相關的基因，通過RT-PCR方法檢測其在16對食管癌及相應的癌旁組織的表達，結果顯示TXNRD3、RAB7、AMOTL2、CCNL1、EIF5A2、p63、MUC4、TMEMl6A和CTTN基因在食管癌組織過表達的

2、頻率大于30％。利用這9個基因內部的UniSTS，進一步通過半定量PCR方法檢測其在另外20對食管癌及配對癌旁組織中的基因組DNA含量，發(fā)現(xiàn)TXNRD3、RAB7、AMOTL2、CCNL1、MUC4、TMEMl6A和CTTN基因在食管癌組織中擴增頻率不低于20％。熒光原位雜交也證實CCNLl和CTTN基因在食管癌組織存在擴增。 定位于11q13上的cortactin(CTTN,也稱為EMS1)基因編碼的蛋白是促進肌動蛋白核化和支

3、鏈形成的重要分子，目前對其在具體腫瘤中作用的研究還相對較少，為此我們對該基因在食管癌中的作用進行了深入的研究。食管癌組織芯片的免疫組化分析發(fā)現(xiàn)CTTN在食管癌中過表達率為68.8％(86/125)，過表達與淋巴結轉移和腫瘤分期相關。11lq13上另一重要癌基因CCND1在食管癌中過表達率為47.0％(55/117)，其表達雖與CTTN表達顯著相關，但與淋巴結轉移等臨床參數(shù)無明顯相關性。說明CTTN基因是11q13上與食管癌淋巴結轉移和腫

4、瘤分期相關的獨立因素。 在食管癌細胞系EC9706的體外實驗中，CTTN RNAi不影響細胞的增殖、平板集落形成、細胞周期進展和對Matrigel的粘附能力，但可抑制細胞的劃痕愈合、運動穿膜、Matrigel侵襲、軟瓊脂集落形成和抗失巢凋亡能力。體內實驗顯示，CTTN表達降低可抑制裸鼠皮下瘤生長和實驗性肺轉移，延長實驗性轉移裸鼠的生存期。針對CTTN影響EC9706細胞抗失巢凋亡能力這一現(xiàn)象，我們進一步探討其分子機制。發(fā)現(xiàn)P13

5、K和MEK抑制劑均可增加EC9706細胞的失巢凋亡，但CTTN只影響Akt的活化，對Erk和EGFR激活無影響，提示CTTN的抗失巢凋亡作用與PI3K-Akt通路有關。我們在KYSE410食管癌細胞中也驗證了CTTN的高表達有助于保護細胞抵抗失巢凋亡，并可提高Akt的活化水平。進一步在EC9706和KYSE410細胞中，Co-IP實驗證實CTTN和PI3K蛋白分子可被共沉淀，提示CTTN可能通過與PI3K相互作用，活化PI3K-Akt通