血清高、低密度脂蛋白膽固醇勻相清除法檢測(cè)新技術(shù)的研究.pdf

1、目的:
　　 分別建立基于混合表面活性劑選擇性作用的可見光勻相清除法和化學(xué)發(fā)光勻相清除法測(cè)定血清高、低密度脂蛋白膽固醇(HDL-C、LDL-C),并構(gòu)建相應(yīng)的檢測(cè)試劑,以實(shí)現(xiàn)血清HDL-C、LDL-C的快速、靈敏測(cè)定。
　　 方法:
　　 本研究通過不同類型的表面活性劑與脂蛋白的反應(yīng)活性、顯色定量體系選擇、液體酶制劑穩(wěn)定技術(shù)等關(guān)鍵技術(shù)研究,分別建立了可見光比色勻相清除法、化學(xué)發(fā)光勻相清除法測(cè)定血清高、低密度脂蛋白

2、膽固醇(HDL-C、LDL-C)的新方法,并研制了相應(yīng)的液體穩(wěn)定試劑。
　　 清除法測(cè)定血清HDL-C原理:第一步,用混合表面活性劑將血清標(biāo)本中的LDL-C、極低密度脂蛋白膽固醇(VLDL-C)、乳糜微粒(CM)等脂蛋白組分特異性裂解并清除,第二步,加入表面活性劑使HDL-C裂解并與膽固醇試劑反應(yīng),采用可見光勻相比色法、化學(xué)發(fā)光勻相法進(jìn)行檢測(cè)；
　　 清除法測(cè)定血清LDL-C原理:第一步,用混合表面活性劑將血清標(biāo)本中的H

3、DL-C、VLDL-C、CM等脂蛋白組分特異性裂解并清除,第二步,加入表面活性劑使LDL-C裂解并與膽固醇試劑反應(yīng),采用可見光勻相比色法、化學(xué)發(fā)光勻相法進(jìn)行檢測(cè)。
　　 結(jié)果:
　　 可見光勻相清除法測(cè)定血清HDL-C,表面活性劑采用a-環(huán)糊精、吐溫80、硫酸葡聚糖、泊洛沙姆F124等的組合,顯色色源采用新型酚衍生物HDAOS,在全自動(dòng)生化分析儀上實(shí)現(xiàn)HDL-C勻相法檢測(cè)。以該法測(cè)定血清HDL-C,線性范圍達(dá)3.91mm

4、ol/L,平均回收率為99.7％,批內(nèi)變異系數(shù)(CV)和批間變異系數(shù)分別為0.0139～0.0243和0.0167～0.0264,與臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程(第3版)推薦的勻相測(cè)定法(試劑由日本第一化學(xué)藥品株式會(huì)社提供)相比,線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)分別為Y=1.013X-0.016、r=0.9975,與臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程(第3版)推薦的硫酸葡聚糖-Mg2+沉淀法(試劑由浙江東甌生物工程有限公司提供)相比,線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)分別為Y=0.999

5、X-0.010、r=0.9956,健康人群的血清HDL-C為1.09～2.25mmol/L(男性)、0.90～2.06mmol/L(女性)。
　　 化學(xué)發(fā)光勻相清除法測(cè)定血清HDL-C,表面活性劑采用a-環(huán)糊精、吐溫80、硫酸葡聚糖、泊洛沙姆 F124等的組合,化學(xué)發(fā)光體系采用對(duì)碘苯酚增強(qiáng)的HRP-魯米諾-H2O2體系,在微孔板化學(xué)發(fā)光儀上實(shí)現(xiàn)HDL-C的勻相法檢測(cè)。以該法測(cè)定血清HDL-C,線性范圍達(dá)3.85mmol/L,平均

6、回收率為100.4％,批內(nèi)變異系數(shù)(CV)和批間變異系數(shù)分別為0.0176～0.0313和0.0215～0.0398,與臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程推薦的勻相測(cè)定法(試劑由日本第一化學(xué)藥品株式會(huì)社提供)相比,線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)分別為 Y=0.996X-0.007、r=0.9978,與臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程推薦的硫酸葡聚糖-Mg2+沉淀法(試劑由浙江東甌生物工程有限公司提供)相比,線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)分別為Y=0.999X-0.002、r=0.997

7、4,健康人群的血清HDL-C為1.09～2.21mmol/L(男性)、0.93～2.01mmol/L(女性)。
　　 可見光勻相清除法測(cè)定血清LDL-C,表面活性劑采用三甲基-β-環(huán)糊精、環(huán)氧乙烷十八烷胺、泊洛沙姆 F88、布里杰-58等的組合,顯色色源采用新型酚衍生物HDAOS,在全自動(dòng)生化分析儀上實(shí)現(xiàn)LDL-C勻相法檢測(cè)。以該法測(cè)定血清LDL-C,線性范圍達(dá)12.91mmol/L,平均回收率為100.7％,批內(nèi)變異系數(shù)(CV

8、)和批間變異系數(shù)分別為0.0036～0.0134和0.0063～0.0147,與臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程推薦的勻相測(cè)定法(試劑由日本第一化學(xué)藥品株式會(huì)社提供)相比,線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)分別為Y=1.017X-0.051、r=0.9981,與臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程推薦的聚乙烯硫酸鹽-聚乙二醇甲醚沉淀法(PVS法,試劑由浙江東甌生物工程有限公司提供)相比、線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)分別為Y=0.993X+0.011、r=0.9990,健康人群的血清LDL-

9、C為2.07～3.11mmol/L。.
　　 化學(xué)發(fā)光勻相清除法測(cè)定血清LDL-C,表面活性劑采用三甲基-β-環(huán)糊精、環(huán)氧乙烷十八烷胺、泊洛沙姆 F88、布里杰-58等的組合,化學(xué)發(fā)光體系采用對(duì)碘苯酚增強(qiáng)的HRP-魯米諾-H2O2體系,在微孔板化學(xué)發(fā)光儀上實(shí)現(xiàn)LDL-C的勻相法檢測(cè)。以該法測(cè)定血清LDL-C,線性范圍為12.95mmol/L,平均回收率為101.2％,批內(nèi)變異系數(shù)(CV)和批間變異系數(shù)分別為0.0126～0.02

10、45和0.0153～0.0316,與臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程推薦的勻相測(cè)定法(試劑由日本第一化學(xué)藥品株式會(huì)社提供)相比,線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)分別為Y=0.968X+0.074、r=0.9933,與臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程推薦的聚乙烯硫酸鹽-聚乙二醇甲醚沉淀法(PVS法,試劑由浙江東甌生物工程有限公司提供)相比,線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)分別為Y=0.946X十0.129、r=0.9944,健康人群的血清LDL-C為2.01～3.01mmol/L。