含植物性雌激素中藥對去卵巢大鼠局灶性腦缺血損傷防治作用的實驗研究.pdf

1、目的：在建立去卵巢大鼠模型的基礎(chǔ)上，通過動物實驗，探討含植物性雌激素中藥對腦缺血損傷的防治作用。 方法：健康雌性Wistar大鼠72只，體重200-250g，隨機分為3組，即正常組、去卵巢組(簡稱去勢組)、去卵巢加中藥組(簡稱實驗組)各24只。經(jīng)適應(yīng)性飼養(yǎng)3天后，將去勢組和實驗組大鼠實施卵巢切除術(shù)，正常組大鼠實施偽手術(shù)，只切除等量脂肪。術(shù)后10天，隔日進行陰道涂片，觀察脫落細胞，以了解去勢是否完全。在確認(rèn)去勢成功后，三組大鼠繼續(xù)

2、給予飼料喂養(yǎng)，實驗組在給予飼料喂養(yǎng)的基礎(chǔ)上同時給予含有雌激素的中藥復(fù)方(黃芪30g、三七粉3g(沖)、銀杏葉6g、蒲黃15g(包煎))灌胃，1次/天。正常組和去勢組給予等量蒸餾水灌胃。自給藥開始2周后，對所有大鼠進行局灶性缺血模型的制作。所有動物在手術(shù)前6小時禁食，以防高血糖對缺血性腦損害的影響，參照文獻，采用線栓法制備大腦中動脈局灶性腦缺血模型，大鼠腹腔內(nèi)注射10％水合氯醛(350mg/kg體重)麻醉后，仰臥固定，頸部正中切口，分離并

3、暴露右側(cè)頸總及頸內(nèi)、頸外動脈，并在頸內(nèi)外動脈分叉處結(jié)扎頸外動脈，右側(cè)頸總動脈剪口，插入頭端燒成圓鈍形直徑為0.25mm的尼龍魚線，進長度約18～19mm，在大腦中動脈起始端堵塞大腦中動脈，然后將頸總動脈連同尼龍魚線一起結(jié)扎，縫合皮膚，放回籠內(nèi)，單籠喂養(yǎng)。選擇蘇醒后左上肢屈曲、行走時向左側(cè)旋轉(zhuǎn)或左側(cè)肢體癱瘓的大鼠為栓堵成功者進行實驗，否則視為栓堵失敗，棄之不用。手術(shù)過程中監(jiān)測大鼠直腸溫度，并用電熱毯保持在36.5～37.5℃。 于

4、造模成功24小時后，處死各組大鼠，取以海馬為中心約10×8×5m<'3>的大腦組織，10％的甲醛固定，乙醇逐級脫水，石蠟包埋，切片機切片，HE染色和尼氏染色，光鏡觀察并攝像。斷頭取血，3500r/min離心10min，提取上清待測，檢測各組大鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白介素8(IL-8)、白介素6(IL-6)、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)含量。用放射免疫法檢測TNF-α、IL-8、IL-6含量。采用雙抗體夾心ABC-ELISA法

5、測定MMP-9含量。在429nm測MMP-9的OD值，MMP-9濃度與OD值成正比，用酶標(biāo)儀測得OD值間接反映其含量的變化。 結(jié)果： 1、含植物性雌激素中藥對去卵巢大鼠局灶性缺血病理組織學(xué)的影響 正常組：海馬CA1區(qū)錐體細胞排列較亂，細胞脫失較多，細胞水腫較明顯。海馬CA3區(qū)錐體細胞脫失，細胞核固縮較多，細胞水腫較明顯。 去勢組：大鼠海馬CA1區(qū)和CA3區(qū)錐體細胞排列稀疏、紊亂，細胞體積縮小，胞核固縮，胞

6、漿濃縮、深染，細胞水腫明顯。 實驗組：海馬CA1區(qū)錐體細胞排列較整齊，細胞脫失少，有少數(shù)細胞核固縮為三角形或多角形，細胞水腫不明顯。海馬CA3區(qū)錐體細胞脫失，部分細胞核固縮，細胞水腫不明顯。 2、含植物性雌激素中藥對去卵巢大鼠局灶性腦缺血后血清中TNF-α、IL-8、IL-6含量的影響 2.1與正常組比較，去勢組大鼠血清中TNF-α含量增高(P<0.05)，與去勢組比較，實驗組血清中TNF-α含量下降(P<0

7、.05)。 2.2與正常組比較，去勢組大鼠血清中IL-8含量增高(P<0.01)，與去勢組比較，實驗組血清中IL-8含量降低(P<0.01)。 2.3與正常組比較，去勢組大鼠血清中IL-6含量增高(P<0.05)，與去勢組比較，實驗組血清中IL-6含量降低(P<0.05)。 3、含植物性雌激素中藥對局灶性缺血大鼠血清中MMP-9含量的影響 與正常組比較，去勢組大鼠血清中MMP-9增加(P<0.05)，與去