樂脈顆粒對大鼠局灶性腦缺血保護作用的實驗研究.pdf

1、目的：腦血管疾病是嚴(yán)重危害人類健康的疾病，是人類致殘和死亡的重要原因之一，其中以缺血性腦損傷最為多見。利用中醫(yī)藥治療腦缺血已顯示了很好的療效。本實驗以三氯化鐵溶液外敷致大腦中動脈栓塞大鼠為模型，分別觀察：1、樂脈顆粒對腦缺血大鼠腦損傷的影響。2、樂脈顆粒對大鼠腦缺血后腦組織線粒體的的影響。3、樂脈顆粒對大鼠腦缺血后細(xì)胞凋亡的影響。 方法：將大鼠隨機分為：假手術(shù)組，缺血組，樂脈顆粒高、中、低治療組(1．2、2．4、4．8g/kg，

2、相當(dāng)于臨床人用量的4、8、16倍)，每組8只。三氯化鐵溶液外敷致大腦中動脈栓塞(MCAT)模型。假手術(shù)組除不進行三氯化鐵處置外，其它均相同。樂脈顆粒組采用灌胃給藥，連續(xù)10天，缺血組給等容量的生理鹽水。術(shù)后6和24小時給動物進行行為評分；斷頭取腦，TTC染色腦梗塞范圍；進行腦含水量檢測：比色法測定腦組織丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)的活性、血中NO含量；放射免疫法測定血中內(nèi)皮素-1(ET-1)、血栓烷素-2(TXB-2)

3、的含量；常規(guī)HE染色；差速離心法提取缺血側(cè)腦組織線粒體，測定腦組織線粒體總ATP酶、SOD活性、GSH-Px活性、線粒體MDA、NO含量；電鏡觀察神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)：FCM檢測細(xì)胞凋亡百分率、Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白的表達。 結(jié)果：梗塞區(qū)面積、腦含水量、行為學(xué)評分測定結(jié)果顯示：與假手術(shù)組比，缺血組腦梗塞區(qū)面積、腦含水量、行為學(xué)評分均明顯升高(P<0.01)，給予樂脈顆粒治療后梗塞區(qū)面積、腦含水量、行為學(xué)評分明顯下降

4、(P<0.01或P<0.05)。腦組織中MDA含量和SOD活性測定結(jié)果顯示：缺血組MDA含量明顯高于假手術(shù)組(P<0.01)，樂脈顆粒治療組中MDA含量顯著低于腦缺血組(P<0.01)。腦缺血后，腦組織中SOD的活性明顯降低(P<0.01)，給樂脈顆粒治療后，腦組織中SOD的活性比缺血組顯著升高(P<0.01)。 血漿中NO含量測定結(jié)果顯示：缺血組NO含量明顯高于假手術(shù)組(P<0.01)，樂脈顆粒治療組中NO含量顯著低于缺血組(

5、P<0.05)。 血漿中ET-1，TXB<,2>測定結(jié)果顯示：缺血組中ET-1，TXB<,2>的含量明顯高于假手術(shù)組(P<0.01)，樂脈顆粒組的ET-1，TXA2含量顯著低于缺血組(P<0.05或P<0.01)。 光鏡觀察腦組織病理變化：缺血組大鼠腦組織中出現(xiàn)血管擴張，部分神經(jīng)元細(xì)胞水腫，胞核濃縮，胞漿疏松淡染及空泡化；假手術(shù)組無上述病理改變；給藥治療后，與缺血組比，變性及退行性變的神經(jīng)元數(shù)目明顯減少，間質(zhì)水腫程度明顯

6、減輕。 電鏡觀察腦缺血后皮層神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)的改變：假手術(shù)組大鼠皮層神經(jīng)細(xì)胞核大而圓，核膜清晰、完整，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體、微管、高爾基復(fù)合體清晰可見，線粒體雙膜結(jié)構(gòu)清晰，嵴排列整齊，缺血組可見神經(jīng)元細(xì)胞水腫，線粒體膜腫脹，部分嵴斷裂、消失、空泡化，細(xì)胞器數(shù)量明顯減少，給予樂脈顆粒治療后可明顯改善上述神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)變化。 腦組織線粒體中NO含量測定結(jié)果顯示：缺血組腦組織線粒體中NO含量明顯高于假手術(shù)組(P<0.01)，樂脈顆

7、粒治療組中N0含量顯著低于缺血組(P<0.0l或P<0.05)。腦組織線粒體中ATP活性測定結(jié)果顯示：與假手術(shù)組比，缺血組腦組織線粒體中ATP的活性明顯降低(P<0.01)，給樂脈顆粒治療后，腦組織線粒體中ATP的活性顯著升高(P<0.01或P<0.05)。 腦組織線粒體中GSH.Px活性測定結(jié)果顯示：與假手術(shù)組比，缺血.組腦組織線粒體中GSH-Px的活性明顯降低(P<0.01)，給樂脈顆粒治療后，腦組織線粒體中GSH.Px的活

8、性顯著升高(P<0.01)。 腦組織線粒體中MDA含量測定結(jié)果顯示：缺血組腦組織線粒體中MDA含量明顯高于假手術(shù)組(P<0.01)，樂脈顆粒治療組中MDA含量顯著低于缺血組(P<0.01)。 腦組織線粒體中SOD活性測定結(jié)果顯示：與假手術(shù)組比，缺血組腦組織線粒體中SOD的活性明顯降低(P<0.01)，給樂脈顆粒治療后，腦組織線粒體中SOD的活性顯著升高(P<0.01)。 FCM檢測細(xì)胞凋亡百分率細(xì)胞凋亡測定結(jié)果顯

9、示：缺血組比假手術(shù)組細(xì)胞凋亡發(fā)生率明顯增加(P<0.01)，給予樂脈顆粒后凋亡率明顯下降(P<0.01)。 FCM測定Caspase.3蛋白的表達：缺血組Caspase一3蛋白表達較假手術(shù)組明顯增高(P<0.01)，給予樂脈顆粒治療后Caspase-3蛋白表達明顯減少(P<0.01)。 FCM測定Bcl-2，Bax蛋白的表達及比值(Bcl-2/Bax)的比較：與假手術(shù)組比較，缺血組Bcl.2蛋白表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義P>0

10、.05)，Bax蛋白表達升高(P<0.01)，Bcl-2/Ba(P<0.01)，與缺血組比，樂脈顆粒組Bcl-2蛋白表達升高(P<0.01或P<0.05)，Bax蛋白表達降低(P<0.01)，Bcl-2／Bax升高(P<0.01或P<0.05)。 結(jié)論：1、樂脈顆粒通過減少腦缺血后脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA，增加SOD活性，降低ET-1、TXA<,2>、NO含量，減輕缺血后腦水腫、缺血程度改善腦缺血。2、樂脈顆粒增加腦缺血后線粒體抗氧