葛根素對大鼠局灶性腦缺血損傷的神經(jīng)保護作用及其機制的研究.pdf

1、本文選用傳統(tǒng)中藥葛根的主要成分葛根素對大鼠大腦中動脈局灶性腦缺血模型進(jìn)行干預(yù)，通過對神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)、尼氏體的平均灰度、神經(jīng)行為學(xué)評分、梗死體積、凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax及TGF-β1的表達(dá)的觀察，來驗證和探討葛根素對缺血性腦損傷的神經(jīng)保護作用及其機制。 方法：80只雄性SD大鼠(體重220g-260g)隨機分為5組：A組(假手術(shù)組+n=16)、B組(缺血對照組n=16)、C組(葛根素75mg/kg組，n=16)、D組(葛根

2、素150mg/kg組，n=16)、E組(曲克蘆丁組125mg/kg，n=16)。A組：大鼠麻醉后，作頸部正中切口，暴露頸總動脈，頸內(nèi)動脈、頸外動脈、翼腭動脈后縫合皮膚。其余各組參考Zea-Longar和Koizumi的插線方法，略加改良，建立局灶性腦缺血動物模型，手術(shù)完畢后立即給予相應(yīng)劑量的藥物，12小時后重復(fù)上述劑量。術(shù)后2小時，用乙醚快速麻醉，拆開縫線，拔出一定長度(1cm左右)的栓線，在結(jié)扎線附近剪斷栓線，縫合皮膚，記錄時間。再灌

3、注24小時后，分別觀察神經(jīng)行為學(xué)評分，腦梗死體積，尼氏小體平均灰度，Bcl-2，Bax及TGF-β1蛋白的表達(dá)。 結(jié)果：1.神經(jīng)行為學(xué)評分：A組為0分，B組(3.7±0.5)明顯高于實驗其它各組(P＜0.01)。C組(2.2±0.7)、D組(2.0±0.6)與E組(2.7±0.5)相比具有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)，而C、D兩組之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 2.腦梗死體積：B組梗死體積為(209±28)mm3、C組為(145

4、±15)mm3、D組為(130±17)mm3、E組為(184±21)mm3。各給藥組的梗死體積明顯小于B組(P＜0.05)，C、D兩組與E組相比均具有明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01)、而C、D兩組之間并無統(tǒng)計學(xué)上的差異(P＞0.05)。 3.病理形態(tài)學(xué)：(1)、尼氏小體；A組尼氏體的平均灰度值最低(109.73±10.96)，尼氏體的含量最高。B組尼氏體的含量最低(178.18±21.66)，其余各組介于二者之間。D組(124.3

5、6±14.85)、E組(151.36±21.75)與缺血對照組相比，尼氏體的含量有了明顯提高，在統(tǒng)計學(xué)上具有明顯差異(P＜0.01)。而C組(163.64±20.29)雖然在形態(tài)學(xué)上與B組相比有了較明顯改善，但在統(tǒng)計學(xué)上無意義(P＞0.05)。D組與E組相比，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。 (2)、Bcl-2免疫組化染色：Bcl-2的表達(dá)以D組(0.68±0.11)和C組(0.49±0.06)為最高，與B組(0.39±0.04

6、)相比具有明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)，但C、D二者之間無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。E組(0.43±0.08)與D組相比具有明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01)，與C組則無統(tǒng)計學(xué)差異。 (3)、Bax免疫組化染色：Bax表達(dá)以B組最強，D組最低，二者具有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01)。D組與E組相比具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。 (4)、TGF-β1免疫組化染色：TGF-β1表達(dá)以D組(0.50±0.08)最強，C組(0.43±0

7、.11)次之，C、D兩組與B組(0.26±0.05)、E組(0.33±0.09)相比均具有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。E組的統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)與B組相比雖有差異，但無統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論：1.改良線栓法制作局灶性缺血模型具有成功率高、模型穩(wěn)定、更接近于人類發(fā)病情況以及可作慢性期實驗等優(yōu)點，是研究局灶性腦缺血再灌注損傷的良好模型。 2.改良線栓法制作局灶性腦缺血模型較傳統(tǒng)線栓法具有如下特點：(1)、栓線固定，不易移位/滑脫，保

8、證了模型的成功率和可靠性。(2)、實現(xiàn)再灌注時，拔線方法直觀，可靠。(3)、增加一次手術(shù)操作并不影響愈合，不會引起其它實驗條件的改變，造成造模條件的差異，保證了模型的同質(zhì)性。 3.葛根素能夠上調(diào)細(xì)胞凋亡相關(guān)基因Bcl-2/Bax的比值，促進(jìn)神經(jīng)修復(fù)相關(guān)蛋白TGF-β1的表達(dá)，明顯縮小梗死體積，減輕神經(jīng)細(xì)胞水腫，改善神經(jīng)功能，其治療效果明顯優(yōu)于陽性藥物對照-曲克蘆丁組。 4.葛根素發(fā)揮神經(jīng)保護作用的機制可能是通過改善能量代