淫羊藿苷對(duì)小鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的防治作用.pdf

1、第一部分
　　 淫羊藿苷對(duì)小鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的防治作用
　　 目的:觀察淫羊藿苷對(duì)小鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的防治作用。
　　 方法：以線栓大腦中動(dòng)脈誘導(dǎo)小鼠局灶性腦缺血再灌注。缺血前30 min灌胃給于不同劑量的淫羊藿苷(25 mg·kg-1、50 mg·kg-1、100 mg·kg-1、200 mg·kg-1)。觀察藥物對(duì)缺血再灌注后神經(jīng)功能缺損癥狀、腦梗死面積、死亡率、HE染色的影響。
　　

2、 結(jié)果：(1)MCAO小鼠神經(jīng)行為缺陷評(píng)分模型組有不同程度的神經(jīng)行為缺陷,藿苷劑量(25 mg·kg-1、50 mg·kg-1、100 mg·kg-1、200 mg·kg-1)灌胃給于呈劑量依賴性的改善缺血再灌注小鼠神經(jīng)行為缺陷。(2)MCAO小鼠梗塞面積及24 h內(nèi)的死亡率測(cè)定藿苷劑量(25 mg·kg-1、50 mg·kg-1、100 mg·kg-1)灌胃給于呈劑量依賴性的減少缺血再灌注小鼠腦組織的梗塞面積和降低死亡率,淫羊藿苷20

3、0 mg·kg-1組死亡率增加。(3)MCAO小鼠病理學(xué)檢查存活細(xì)胞減少,壞死嚴(yán)重,淫羊藿苷劑量(25 mg·kg-1、50 mg·kg-1、100 mg·kg-1、200 mg·kg-1)灌胃給于呈劑量依賴性的改善梗塞區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的變性程度。
　　 結(jié)論：淫羊藿苷給于灌胃對(duì)小鼠局灶性腦缺血再灌注損傷具有一定的保護(hù)作用。
　　 第二部分反相高效液相色譜法測(cè)定小鼠腦組織磷酸二酯酶活性的以及淫羊藿苷體外處理的影響
　　

4、 目的:建立小鼠腦組織中(皮層、海馬、紋狀體)磷酸二酯酶(PDE)活性的反相高效液相色譜法測(cè)定法,并觀察淫羊藿苷體外對(duì)磷酸二酯酶的抑制作用。
　　 方法：小鼠腦組織(皮層、海馬、紋狀體)勻漿后,可溶部分為酶樣品,以環(huán)鳥苷酸(cGMP)和環(huán)腺苷酸(cAMP)為反應(yīng)底物,使用反相高效液相色譜法,測(cè)定小鼠腦組織(皮層、海馬、紋狀體)PDE活性。
　　 結(jié)果：底物cGMP、cAMP分離良好,無干擾,cGMP在2～100μmol·

5、L-1,cAMP在0.7～50μmol·L-1的范圍內(nèi)線性良好。方法的平均回收率在90.0％～110.0％內(nèi),日內(nèi)及日間RSD均<10％。淫羊藿苷呈劑量依賴性的抑制能分解cGMP的磷酸二酯酶和能分解cAMP的磷酸二酯酶的活性,皮層中其半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為275.0±39.4μmol·L-1和85.1±14.2μmol·L-1,海馬中IC50分別為125.73±25.8、67.2±15.2μmol·L-1,紋狀體中IC50分別為

6、121.11±13.7、40.78±10.23μmol·L-1。
　　 結(jié)論：根據(jù)底物量的減少,確認(rèn)小鼠腦組織中(皮層、海馬、紋狀體)磷酸二酯酶的存在,淫羊藿苷在體外對(duì)磷酸二酯酶有抑制作用。
　　 第三部分小鼠局灶性腦缺血再灌注后腦組織中PDE、SOD和MDA的變化及淫羊藿苷的影響
　　 目的:觀察小鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后24h內(nèi)腦皮層中磷酸二酯酶(PDE)活性、超氧化物岐化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)

7、含量的變化趨勢(shì)及淫羊藿苷對(duì)PDE、SOD及MDA的影響。
　　 方法：以線栓大腦中動(dòng)脈誘導(dǎo)小鼠局灶性腦缺血再灌注,缺血前30 min灌胃給于淫羊藿苷(100 mg·kg-1),分別于缺血后0.5 h、1 h、2 h、4 h、8 h、24 h采樣。應(yīng)用高效液相(HPLC)測(cè)定各組小鼠腦皮層中磷酸二酯酶(PDE)的活性,觀察腦缺血后24h內(nèi)PDE在腦皮層中的變化；應(yīng)用比色法測(cè)定各組小鼠腦皮層SOD活性和MDA含量。
　　 結(jié)

8、果：0.5 h、1 h、2 h時(shí)模型組cGMP-PDE有升高(P<0.01)；淫羊藿苷組阻遏其升高(P<0.01)。0.5 h、1 h、2 h、24 h時(shí)模型組cAMP-PDE活性有升高(P<0.05)；淫羊藿苷組阻遏其升高(P<0.01)。在各時(shí)間點(diǎn)模型組SOD活性都有降低(P<0.01):淫羊藿苷組阻止其降低(P<0.01)。1 h、2 h、4 h、8 h、24 h時(shí)模型組MDA含量有升高(P<0.01):1 h、4 h、8 h、2