外源性龍血素B和鈉通道調(diào)制劑對(duì)胞內(nèi)鈣濃度的動(dòng)態(tài)調(diào)制.pdf

1、本論文采用鈣離子熒光成像技術(shù)，免疫印跡以及行為學(xué)的方法，分別對(duì)龍血素B引起大鼠背根神經(jīng)節(jié)（DRG）細(xì)胞內(nèi)鈣離子上升的機(jī)制和東亞鉗蝎毒素(BmK)對(duì)于大鼠腦突觸體膜內(nèi)鈣離子變化的協(xié)同作用進(jìn)行了研究。
　　 1．龍血素B可誘導(dǎo)大鼠DRG神經(jīng)元胞內(nèi)鈣離子緩慢上調(diào)在本研究中，運(yùn)用Fura-2熒光染色的方法觀察了在急性分離的DRG神經(jīng)元細(xì)胞上由血竭中活性成分龍血素B誘導(dǎo)的游離態(tài)鈣離子的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，龍血素B會(huì)劑量依賴地引起DRG神經(jīng)元胞

2、內(nèi)鈣離子的上升。在細(xì)胞外液無(wú)鈣的條件下可引起同樣的效應(yīng)，但胞內(nèi)鈣離子的上升幅度相對(duì)較小。這表明DRG細(xì)胞內(nèi)鈣離子的升高主要是由細(xì)胞外鈣離子內(nèi)流，而不是由于細(xì)胞器如線粒體和胞內(nèi)鈣庫(kù)的鈣離子釋放產(chǎn)生的。
　　 另外，咖啡因和龍血素B共孵育也可誘導(dǎo)胞內(nèi)鈣離子的升高，但是其上升幅度明顯小于單獨(dú)施加咖啡因，提示龍血素B作用的靶器或通路與咖啡因誘導(dǎo)通路或靶器有所重疊。此外，與咖啡因，高鉀溶液和辣椒素相比，龍血素誘導(dǎo)的DRG神經(jīng)元胞鈣離子的上

3、升更加緩慢且持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)。這些結(jié)果表明，龍血素B可穩(wěn)定且與眾不同地誘發(fā)DRG神經(jīng)元胞內(nèi)鈣離子濃度升高。
　　 2．特異性鈉通道調(diào)制劑BmKI和BmK IT2的藥理協(xié)同作用在本研究中，運(yùn)用Fura-2熒光染色方法分別觀察了特異性鈉通道位點(diǎn)3調(diào)制劑BmKI和特異性鈉通道位點(diǎn)4調(diào)制劑BmK IT2單體以及共給藥條件下引起腦突觸體膜鈣離子的變化，同時(shí)，運(yùn)用免疫印記和行為學(xué)的方法的方法分別觀察了BmK I和BmKIT2誘導(dǎo)胞外細(xì)胞信號(hào)調(diào)節(jié)

4、激酶(ERK)磷酸化以及對(duì)大鼠驚厥發(fā)作的效應(yīng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，BmK IT2沒(méi)有能力改變突觸體膜鈣離子濃度或致ERK磷酸化。但是，BmK IT2對(duì)于BmK I引起的突觸體膜上鈣離子的上升具有正協(xié)同作用，且10∶1的BmK I和BmK IT2組合在加藥的前半段時(shí)間（0-7.5分鐘）鈣離子上升的速率最快。觀察鈣離子的下游靶點(diǎn)ERK發(fā)現(xiàn)，與單獨(dú)施加BmK I相比較，共同施加BmK I和BmK IT2可以使得突觸體膜內(nèi)更加多的ERK磷酸化被激活。由于