龍血素A-B抗血小板作用及機(jī)制研究.pdf

1、第一部分，龍血素A/B抗血小板功能研究
　　目的:傳統(tǒng)中藥血竭具有活血化瘀、消腫定痛的作用。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)其有活血與止血作用、鎮(zhèn)痛抗炎和抗血小板聚集作用。血竭中抗血栓成分主要為黃酮類化合物,龍血素A和龍血素B即是其中兩種重要的成分,上海大學(xué)生命科學(xué)院研究顯示300μg/ml(約1mM)的龍血素A和龍血素B能80％以上的抑制ADP誘導(dǎo)的人血小板聚集作用,但對(duì)其他激動(dòng)劑如膠原、CRP(collagenrelatedpeptide,膠原相

2、關(guān)肽)、凝血酶和ADP(adenosinediphosphate,二磷酸腺苷)誘導(dǎo)的血小板聚集和其他的血小板功能以及抗血小板機(jī)制尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)主要探討血竭黃酮類化合物龍血素A和龍血素B抗血小板作用及其機(jī)制。
　　方法:采用血小板聚集檢測(cè)儀、流式細(xì)胞儀和熒光顯微鏡觀察不同濃度的龍血素A和龍血素B對(duì)血小板聚集、釋放、擴(kuò)展等功能的影響。
　　結(jié)果:龍血素A和龍血素B均能顯著性的抑制膠原、CRP、ADP和凝血酶誘導(dǎo)的小鼠血小板聚集

3、,兩者均呈劑量依賴性。龍血素A對(duì)膠原刺激的血小板聚集抑制作用較強(qiáng),100μM抑制血小板聚集達(dá)84.8%,對(duì)CRP、ADP和凝血酶刺激的血小板聚集抑制作用依次減弱;龍血素B對(duì)膠原和CRP刺激的血小板抑制作用類似于龍血素A對(duì)膠原刺激的血小板抑制作用,同樣地,對(duì)ADP和凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集抑制作用較弱。龍血素A和龍血素B同時(shí)能顯著的抑制凝血酶刺激的血小板P-selectin表達(dá),但僅龍血素A能顯著的抑制CRP刺激的血小板P-selectin

4、表達(dá),龍血素B則對(duì)其表達(dá)幾乎沒有影響。另外,龍血素A能顯著的抑制小鼠血小板ATP的釋放和人血小板在固化纖維蛋白原上的擴(kuò)展。
　　結(jié)論:龍血素A和龍血素B能劑量依賴性的的抑制膠原、CRP、ADP和凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集,龍血素A和龍血素B還能顯著的抑制凝血酶刺激的血小板P-selectin表達(dá),龍血素A能顯著的抑制小鼠血小板ATP的釋放和人血小板在固化纖維蛋白原上的擴(kuò)展。
　　第二部分，龍血素A/B抗血小板作用機(jī)制研究

5、　　目的:探討龍血素A和龍血素B發(fā)揮抗血小板活化的作用機(jī)制
　　方法:洗滌血小板孵育龍血素A和龍血素B后,給予膠原刺激血小板活化,裂解細(xì)胞,采用WesternBlot技術(shù)檢測(cè)Akt(Ser473/474)、Src(Tyr416)和JNK(Thr183/Tyr185)的磷酸化表達(dá),并檢測(cè)給予龍血素A后不同時(shí)間點(diǎn)以及協(xié)同給予血小板PI3K抑制劑后血小板Akt磷酸化表達(dá)的變化。
　　結(jié)果:龍血素A和龍血素B能明顯的抑制膠原刺激的A