鈣激活氯通道ANO1-TMEM16A在腫瘤發(fā)生、發(fā)展和痛覺(jué)調(diào)制中的作用機(jī)制研究.pdf

1、一:研究表明,細(xì)胞膜表面離子通道異常表達(dá)以及胞內(nèi) Ca2+內(nèi)穩(wěn)態(tài)失衡可影響細(xì)胞遷移和凋亡。鈣激活氯通道廣泛表達(dá)于上皮細(xì)胞并參與細(xì)胞分泌以及容量性調(diào)節(jié),從而維持細(xì)胞在遷移、分化以及凋亡等生理過(guò)程中的離子平衡。近期發(fā)現(xiàn)的鈣激活氯通道 ANO1/TMEM16A定位于人染色體11q13區(qū)域,已有報(bào)道表明ANO1基因定位于人類(lèi)染色體11q13被稱為“Amplicon core”的區(qū)域,此區(qū)域很多基因在上皮類(lèi)癌癥如乳腺癌、肺癌和口腔上皮癌中高表達(dá)且

2、在癌癥發(fā)生發(fā)展過(guò)程中均發(fā)揮重要作用,因此提示 ANO1在上皮類(lèi)腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。本研究探討了鈣激活氯通道ANO1在前列腺癌發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中的作用。
　　本研究首先證實(shí),相對(duì)于人正常前列腺上皮細(xì)胞系RWPE-1,ANO1mRNA及蛋白水平在人前列腺癌細(xì)胞系LNCaP和PC-3中表達(dá)明顯增高;全細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)在此兩種前列腺癌細(xì)胞系中,ANO1通道電流明顯增大。免疫組化實(shí)驗(yàn)證實(shí) ANO1在人前列腺癌組織中高表達(dá)而在前

3、列腺增生和癌旁組織中低表達(dá)或無(wú)表達(dá),并且隨著TNM臨床分期及Gleason評(píng)分的增高ANO1表達(dá)增加。通過(guò)設(shè)計(jì)三段針對(duì)ANO1 N端的shRNA,應(yīng)用CCK8、克隆形成、劃痕以及Transwell小室等實(shí)驗(yàn)手段進(jìn)一步證實(shí), ANO1沉默可以明顯抑制PC-3前列腺癌細(xì)胞系的增值、遷移以及侵襲等能力。此外,裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)證實(shí)將 PC-3細(xì)胞系誘導(dǎo)的裸鼠瘤體內(nèi)ANO1沉默后可明顯抑制腫瘤的生長(zhǎng)。本學(xué)位論文的第一部分得出如下結(jié)論:
　　

4、1.鈣激活氯通道ANO1mRNA和蛋白水平在人前列腺癌細(xì)胞系LNCaP和PC-3中表達(dá)明顯高于人正常前列腺上皮細(xì)胞系RWPE-1;
　　2.鈣激活氯通道 ANO1在人前列腺癌組織中高表達(dá),而在前列腺增生和前列腺癌癌旁組織中無(wú)表達(dá)或低表達(dá),并且隨著前列腺癌增加而 ANO1表達(dá)水平上升;
　　3.抑制鈣激活氯通道ANO1的表達(dá)可抑制PC-3前列腺癌細(xì)胞系體外增值、遷移、侵襲效率以及裸鼠體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)能力;
　　4.膜蛋白 A

5、NO1也許可作為前列腺癌治療和治療過(guò)程中恢復(fù)的潛在靶點(diǎn)和生物標(biāo)志物。
　　摘要二:鈣激活氯通道ANO1/TMEM16A廣泛表達(dá)于小DRG神經(jīng)元中,而小DRG神經(jīng)元主要參與傷害性感受調(diào)節(jié),提示ANO1在痛覺(jué)傳導(dǎo)過(guò)程中的作用。為探究鈣激活氯通道ANO1在傷害性感受調(diào)節(jié)中的作用,本研究首先記錄了ANO1對(duì)于小DRG神經(jīng)元興奮性的影響,過(guò)表達(dá)ANO1可使小DRG神經(jīng)元細(xì)胞去極化并且增加其興奮性。應(yīng)用real-time PCR和wester

6、n手段證實(shí),在CFA誘導(dǎo)的大鼠足底炎癥痛模型中ANO1的mRNA和蛋白表達(dá)水平降低,并且隨著炎癥痛的緩解而表達(dá)回升至正常水平。此外,大鼠鞘內(nèi)注射ANO1-shRNA敲低DRG神經(jīng)元細(xì)胞中的ANO1后可明顯降低大鼠足底熱敏痛閾值,白介素4(IL-4)在CFA誘導(dǎo)的大鼠足底炎癥痛模型中的表達(dá)情況呈現(xiàn)出與ANO1相似的趨勢(shì)。在原代培養(yǎng)的小DRG神經(jīng)元細(xì)胞中用IL-4刺激可使ANO1的mRNA表達(dá)水平呈劑量依賴性增加,且大鼠鞘內(nèi)注射IL4-sh

7、RNA后可使DRG神經(jīng)元細(xì)胞中的ANO1mRNA表達(dá)降低。在IL-4敲除小鼠的DRG神經(jīng)元細(xì)胞中ANO1的mRNA和蛋白表達(dá)水平也明顯低于正常小鼠,在人支氣管上皮細(xì)胞HBSMC中IL-4通過(guò)經(jīng)典的STAT6通路調(diào)節(jié)ANO1的表達(dá)。本研究證實(shí)了鈣激活氯通道ANO1受抗炎因子IL-4調(diào)節(jié)而在慢性炎癥痛過(guò)程中起到鎮(zhèn)痛作用,推測(cè)此過(guò)程構(gòu)成了神經(jīng)-免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)的反饋性保護(hù)機(jī)制。
　　本學(xué)位論文的第二部分得出如下結(jié)論:
　　1.過(guò)表達(dá)鈣