LADA患者羅格列酮的治療及其免疫機(jī)制研究.pdf

1、第一部分 LADA患者羅格列酮治療的3年前瞻性觀察。 目的：觀察羅格列酮對LADA患者胰島β細(xì)胞功能的保護(hù)作用。設(shè)計：根據(jù)抗體滴度及空腹C肽(FCP)水平將LADA患者分為口服藥物治療和早期胰島素治療的兩個亞組，分別采用羅格列酮或羅格列酮與胰島素合用的干預(yù)治療，進(jìn)行為期3年的分層隨機(jī)對照前瞻性研究。 方法：谷氨酸脫羧酶抗體(GAD-Ab)陽性、FCP≥0.2nmol/L、病程5年以內(nèi)的54例LADA患者納入研究，口服藥物

2、治療的LADA患者隨機(jī)分為磺脲類藥物治療組(SUs組，n=15)和羅格列酮治療組(RSG組，n=15)；將早期胰島素治療組的LADA患者隨機(jī)分為單用胰島素治療組(INS組，n=12)和羅格列酮與胰島素合用治療組(INS+RSG組，n=12)。在隨訪過程中，按照患者的理想體重給予飲食運(yùn)動指導(dǎo)，根據(jù)血糖控制需要調(diào)整藥物劑量，口服藥物治療組患者可加用二甲雙胍。檢測HLA-DQA1-DQB1基因?；颊呙?個月來我科隨訪一次，進(jìn)行口服葡萄糖耐量試

3、驗(OGTT)，記錄身高、體重、血壓值，檢測空腹血糖和糖負(fù)荷后2小時血糖、肝功能、血脂四項和糖化血紅蛋白，留取血清標(biāo)本統(tǒng)一進(jìn)行FCP和糖負(fù)荷后2小時C肽(PCP)的檢測。 結(jié)果：1)口服藥物治療組，3年隨訪期間無LADA患者出現(xiàn)胰島功能衰竭。SUs組和RSG組HbAlc水平與基線比較均得到改善，且RSG 組平均HbAlc水平小于7％，持續(xù)到3年隨訪結(jié)束時。6個月時，RSG組HOMA2-IR改善(1.71±0.52 mmol*mU

4、/L<'2>vs 2.19±0.79 mmol*mU/L<'2>，P<0.05)，同時FCP水平降低(0.69±0.27 nmol/L vs 0.83±0.24 nmol/L，P<0.05)，之后FCP水平持續(xù)穩(wěn)定。除了SUs組在36個月時PCP水平出現(xiàn)降低(1.86±0.95nmol/L vs 2.75±1.81nmol/L，P<0.05)外，兩組PCP和△CP水平無明顯變化。兩組比較，自18個月始RSG組PCP水平(3.15±1.9

5、5nmol/L vs 1.99±0.76nmol/L，P<0.05)和△CP水平(2.45±1.87nmol/Lvs 1.32±0.70nmol/L，P<0.05)(△CP=PCP-FCP)一直較SUs組PCP水平和△CP水平升高；RSG組HOMA2-％B較SUs組HOMA2-％B在24個月(82.78±52.9％vs 52.51±26.77％，P<0.05)和36個月(73.46±36.87％vs 43.27±30.48％，P<0.0

6、5)時升高。 2)早期胰島素治療組，3年隨訪期間共有9例LADA患者出現(xiàn)胰島功能衰竭。INS+RSG組的FCP水平除在36個月時出現(xiàn)降低(0.34±0.28nmol/L vs 0.54±0.31 nmol/L，P<0.05)外，保持穩(wěn)定；而INS組FCP水平白6個月始(0.38±0.29nmol/L vs 0.57±0.46nmol/L，P<0.05)出現(xiàn)持續(xù)性的下降。兩組比較，INS+RSG組較INS組FCP水平12個月始出現(xiàn)升高，但

7、到36個月時顯著性差異消失。INS+RSG組的PCP和△CP水平在3年隨訪期間無顯著性的改變，而INS組自12個月時PCP水平(0.71±0.72nmol/L vs 1.35±0.94nmol/L，P<0.01)和△CP水平(0.44±0.58nmol/L vs 0.78±0.70nmol/L，P<0.05)出現(xiàn)持續(xù)性的降低。兩組比較，INS+RSG組PCP水平(12個月后)和△CP水平(18個月后)高于INS組。 結(jié)論：羅格列

8、酮口服或羅格列酮與胰島素合用，均可能對LADA患者的胰島功能有保護(hù)作用。 第二部分 LADA患者CD4<'+>調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的變化。 目的：觀察LADA患者CD4<'+>CD25<'+>T細(xì)胞和CD4<'+>T細(xì)胞的FOXP3mRNA表達(dá)，旨在探討LADA免疫學(xué)的發(fā)病機(jī)制。 對象與方法：LADA患者67例、2型糖尿病30例、正常對照30例，通過流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血CD3<'+>、CD4<'+>、CD8<'+>、CD

9、4<'+>CD25<'+>T細(xì)胞陽性細(xì)胞百分率。采用磁珠分離CD4<'+>T細(xì)胞，用real time-PCR方法，半定量檢測CD4<'+>T細(xì)胞的FOXP3 mRNA表達(dá)水平。 結(jié)果： 1)LADA患者與正常對照相比，CD4<'+>CD25<'+>T細(xì)胞百分率(4.1±1.9％vs 2.8±1.5％，P<0.01)和CD4<'+>CD25<'+>T細(xì)胞占CD4<'+>T細(xì)胞比例升高(11.9±5.0％vs 8.2±3.

10、7％，P<0.01)，與2型糖尿病相比無顯著性差異。LADA患者較正常對照，CD8<'+>T細(xì)胞百分率升高(24.6±6.8％vs 19.4±7.1％，P<0.01)，且CD4<'+>/CD8<'+>T細(xì)胞的比值下降(1.5±0.5 vs 1.9±0.6，P<0.01)。LADA患者CD4<'+>CD25<'+>T細(xì)胞占CD4<'+>T細(xì)胞比例與年齡、病程、HbA1c、FCP、GAD-Ab滴度均無顯著性相關(guān)(P>.005)，CD8<'+

11、>T細(xì)胞與GAD-Ab滴度呈正相關(guān)(r=0.292，P<0.05)。 2)LADA患者CD4<'+>T細(xì)胞的FOXP3 mRNA表達(dá)水平較正常對照明顯降低(0.52倍，P<0.01，n=10)。 結(jié)論：LADA患者CD4<'+>CD25<'+>T細(xì)胞百分率和CD4<'+>CD25<'+>T細(xì)胞占CD4<'+>T細(xì)胞比例升高，但CD4<'+>T細(xì)胞的FOXP3 mRNA表達(dá)水平降低，提示存在調(diào)節(jié)性T細(xì)胞抑制功能缺陷。

12、 第三部分羅格列酮上調(diào)LADA患者CD4+T細(xì)胞FOXP3mRNA的表達(dá) 目的：觀察羅格列酮對LADA患者CD4<'+>調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響。 方法：1uM、10uM和100uM羅格列酮干預(yù)體外培養(yǎng)分離的LADA患者外周血CD4<'+>T細(xì)胞。MTT法檢測細(xì)胞活性，H<'3>摻入法檢測增殖抑制率。流式細(xì)胞術(shù)檢測CD4<'+>CD25<'+>T細(xì)胞比值。RT-PCR檢測PPARγmRNA、TGF-β mRNA表達(dá)，Real

13、 Time-PCR檢測FOXP3 mRNA表達(dá)。3例LADA患者加服羅格列酮4mg/天，比較6個月前后CD4<'+>CD25<'+>T細(xì)胞比例和CD4<'+>T細(xì)胞FOXP3 mRNA的表達(dá)。 結(jié)果： CD4<'+>T細(xì)胞表達(dá)PPARγmRNA。1)體外干預(yù)：羅格列酮干預(yù)培養(yǎng)CD4<'+>T細(xì)胞，濃度依賴性抑制PHA刺激的CD4<'+>T細(xì)胞增殖。1uM和10uM羅格列酮對CD4<'+>CD25<'+>T細(xì)胞比例無影響，100u

14、M羅格列酮降低CD4<'+>CD25<'+>T細(xì)胞比例。10uM羅格列酮上調(diào)CD4<'+>T細(xì)胞的FOXP3 mRNA表達(dá)，但CD4<'+>T細(xì)胞的TGF-β1mRNA表達(dá)無顯著變化。小劑量IL-2與羅格列酮體外共同干預(yù)培養(yǎng)CD4<'+>T細(xì)胞，1uM羅格列酮(藥理濃度范圍內(nèi))升高CD4<'+>T細(xì)胞FOXP3 mRNA表達(dá)。2)體內(nèi)干預(yù)：3例LADA患者使用胰島素合用羅格列酮治療半年后，雖然CD4<'+>CD25<'+>T細(xì)胞比例無升