大鼠高位脊髓損傷后心肌細(xì)胞的能量代謝變化和過(guò)氧化物體增殖物激活型受體α的表達(dá).pdf

1、目的：探討大鼠高位脊髓損傷（SCI）致心肌損傷中心肌細(xì)胞的能量代謝變化以及心肌細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子過(guò)氧化物酶體增值激活受體α（PPAR-α）的表達(dá)，闡明SCI后心肌損傷是否與心肌細(xì)胞的能量代謝變化和心肌細(xì)胞PPAR-α表達(dá)有關(guān)。
　　方法：健康成年雄性SD大鼠60只，清潔級(jí)，體重250-300g，被隨機(jī)分為10組，每組6只，使用改良Allens打擊法對(duì)頸7損傷建立高位頸髓損傷模型。分為假手術(shù)對(duì)照組（TS組）和高位頸髓損傷組（SCI組），

2、每組分別設(shè)損傷后6h、12h、24h、48h及72h五個(gè)時(shí)點(diǎn)。建模成功后，從大鼠腹主動(dòng)脈收集動(dòng)脈血3ml，測(cè)定肌酸激酶（CK）及肌酸激酶同工酶（CK-MB）含量；剪取 SD大鼠右心尖同一部位心肌組織，使用透射電鏡觀察心肌細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征，使用高效液相色譜儀檢測(cè)心肌組織的ATP、AMP、ADP含量，同時(shí)檢測(cè)心肌細(xì)胞的Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶含量，游離脂肪酸和乳酸含量，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)PPAR-αmRN

3、A的表達(dá)變化，Western blot法檢測(cè)心肌組織PPAR-α蛋白變化。
　　結(jié)果：（1）SCI組各個(gè)時(shí)點(diǎn)的血清CK和CK-MB含量均高于TS組各個(gè)時(shí)點(diǎn)的含量（P<0.05）；SCI組CK及CK-MB含量在損傷后6h開(kāi)始升高，于損傷后48h開(kāi)始下降，損傷后72h仍高于TS組。（2）透射電鏡結(jié)果顯示：TS組各時(shí)點(diǎn)大部分心肌細(xì)胞的細(xì)胞核結(jié)構(gòu)、肌節(jié)完整，肌絲清晰完整；細(xì)胞膜完整，細(xì)胞未見(jiàn)空泡樣變性，線粒體嵴結(jié)構(gòu)清晰。SCI組心肌細(xì)胞出

4、現(xiàn)肌絲溶解、肌節(jié)斷裂，線粒體腫脹、嵴溶解，部分出現(xiàn)空泡，細(xì)胞壞死等改變；細(xì)胞膜部分破壞，核染色質(zhì)盤旋并邊集，出現(xiàn)細(xì)胞空泡結(jié)構(gòu)；線粒體出現(xiàn)明顯移位，濃縮。（3）能量代謝底物與ATP酶的檢測(cè)結(jié)果：① SCI組各個(gè)時(shí)點(diǎn)ATP的重量比均低于TS組的各個(gè)時(shí)點(diǎn)的ATP的重量比（P<0.05），SCI組ATP的重量比在損傷后12h最低。②SCI組各個(gè)時(shí)點(diǎn)的Na+-K+-ATP酶含量與Ca2+-Mg2+-ATP酶含量均低于TS組的各個(gè)時(shí)點(diǎn)（P<0.05

5、），心肌細(xì)胞Na+-K+-ATP酶與Ca2+-Mg2+-ATP酶含量在大鼠損傷6h后開(kāi)始下降，24h達(dá)到最低（P<0.05），于48h后開(kāi)始升高，但是72h仍舊低于假手術(shù)對(duì)照組（P<0.05）。③ SCI組心肌細(xì)胞FFA含量和LD含量在損傷后6h開(kāi)始下降，持續(xù)到損傷后24h（P<0.05），于損傷后48h開(kāi)始升高（P<0.05），72h仍在升高，且高于假手術(shù)對(duì)照組（P<0.05）。（4）SCI組各個(gè)時(shí)點(diǎn)的PPAR-αmRNA表達(dá)量均低于

6、TS組的各個(gè)時(shí)點(diǎn)（P<0.05）；SCI組在損傷后12h表達(dá)量最低（P<0.05），損傷后72h的表達(dá)量高于損傷組的其他時(shí)點(diǎn)（P<0.05），但低于TS組的相應(yīng)點(diǎn)（P<0.05）。SCI組各個(gè)時(shí)點(diǎn)的PPAR-α蛋白質(zhì)含量低于TS組的各個(gè)時(shí)點(diǎn)（P<0.05）；SCI組PPAR-α蛋白質(zhì)含量在各時(shí)點(diǎn)呈時(shí)相性表達(dá)，損傷后12h含量最低，24h后開(kāi)始升高，但仍然低于TS組（P<0.05）。
　　結(jié)論：大鼠高位脊髓損傷后血清CK和CK-MB