海參廢液中活性多糖的提取及其免疫活性的研究.pdf

1、海參體內(nèi)的活性多糖能夠提高機體免疫力，具有抗血栓、抗腫瘤、抗凝血、降低血清膽固醇等功效。目前，國內(nèi)海參產(chǎn)品主要有海參鮮品、傳統(tǒng)海參干品、深加工的海參食品。而傳統(tǒng)海參干品仍占據(jù)著市場。在干海參的生產(chǎn)過程中，通過煮制鮮海參，產(chǎn)生了大量廢液。這些廢液含有海參多糖等功效成分，被企業(yè)不經(jīng)處理就排放入海。從海參加工廢液中提取海參多糖，不僅能降低生產(chǎn)成本，為企業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟效益，還將減少由廢液處理不當所造成的環(huán)境污染。
　　 本文首先研究了

2、苯酚硫酸法測定海參多糖的準確性和影響因素，找出了該方法在測定應用中的缺陷，探索了海參多糖特異性顯色的影響因素，建立了準確測定海參多糖含量的天青試劑Ⅰ顯色-分光光度測定方法。其次，以海參加工廢液為原料，利用超濾、噴霧干燥、SFE、酶解、醇沉的工藝除去雜質(zhì)，確定了提取海參多糖的最佳工藝，并通過活性炭脫色、醋酸鉀溶液沉淀多糖、凝膠柱層析純化得到精致多糖。最后，對所提取海參多糖進行了急毒性實驗和免疫調(diào)節(jié)作用的研究。
　　 結(jié)果如下:

3、r>　　 1.確定了苯酚硫酸法的最大吸收波長為488.73nm，并建立了苯酚硫酸法測定多糖的標準曲線，A=4.5013x+0.001，R2=0.9997。但是本方法測定樣品中海參多糖的含量，數(shù)據(jù)波動大。進一步試驗發(fā)現(xiàn)，苯酚硫酸法不適合海參多糖含量的測定。在此基礎上，探索了樣品前處理對本方法測定海參多糖的影響，結(jié)果是乙醇沉淀多糖這一步驟對實驗結(jié)果影響很大。另外，樣品中存在的葡萄糖、蛋白質(zhì)在測定時之前必須除去，它們對結(jié)果影響值接近1∶1。

4、
　　 2.建立了海參多糖特異性顯色法測定海參多糖，其最大吸收波長為547nm，樣品液中海參多糖濃度處于5-40mg/L時，標準曲線A=0.0087x+0.2057，R2=0.9914。該方法加樣回收率為95.47％，其變異系數(shù)為1.41％(n=6)，即本方法能用來測定海參多糖的含量。同時，用磺酸基間接測定海參多糖含量的方法驗證了本方法測定海參多糖含量的準確性和可靠性。
　　 3.通過比較長島海參、薛家島海參、張公島三種

5、原料及其煮汁，發(fā)現(xiàn)長島海參的營養(yǎng)價值最高，同時在其煮汁的干物質(zhì)中灰分和蛋白質(zhì)含量較高，碳水化合物和脂類含量較少。對企業(yè)提供海參廢液的基本營養(yǎng)成分進行了分析，發(fā)現(xiàn)水分含量最高，其次是灰分和蛋白質(zhì)。測定微量元素中Na含量最多。另外，對干海參和海參加工廢液中海參多糖含量的測定，確定了海參加工廢液的應用價值。
　　 4.通過實驗得出海參多糖的最佳提取工藝條件為:
　　 (1)超濾脫鹽工藝:選用20KD的聚礬類中空纖維膜組件對海參

6、廢液進行超濾處理，最佳條件為超濾壓力0.20MPa，25℃左右作為超濾溫度，料液體積流量控制在0.04-0.05L/min。
　　 (2)干制工藝:干燥方式選擇噴霧干燥，控制其進出風溫度為200-210/100-105℃，所得干粉含水量為3.3％，得率為5.3％。
　　 (3)脫脂工藝:脫脂方式選擇SFE脫脂，最佳條件為萃取壓力35MPa，萃取溫度50℃，CO2流量30kg/h，萃取時間3h。
　　 (4)酶解工

7、藝:選擇中性蛋白酶為實驗用酶，其用量為1.5％，酶解溫度55℃，酶解時間8h。
　　 (5)乙醇沉淀工藝:乙醇溶液濃度為80％，無水乙醇洗滌次數(shù)3次。
　　 (6)最佳工藝提取海參多糖的得率為13.22％，海參多糖的純度為37.83％。
　　 5.粗多糖經(jīng)活性炭吸附脫色、醋酸鉀溶液去蛋白質(zhì)、凝膠柱層析處理后，獲得精致多糖。其性狀為白色粉末，無臭、無味，有吸濕性，易溶于水，尤易溶于熱水，不溶于高濃度的乙醇、丙酮、乙