HPO-205與EDAG基因的克隆與功能研究.pdf

1、浙江大學(xué)博士學(xué)位論文HPO205與EDAG基因的克隆與功能研究姓名：閭軍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：傳染病指導(dǎo)教師：蔡衛(wèi)民2001.10.1博士學(xué)位論文HPO205與EDAG基因的克隆與功能研究HPO一205與EDAG基因的克隆與功能研究中文摘要浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院九九級(jí)博士研究生導(dǎo)師內(nèi)科學(xué)(傳染病專業(yè))閭軍蔡衛(wèi)民研究員哺乳動(dòng)物新生肝及胚胎肝中存在特異刺激肝細(xì)胞增殖的細(xì)胞活性因子。f1994年～——一～Hagiya等報(bào)道從新生鼠肝中分離出肝再生增

2、強(qiáng)因子(augmenterofliverregeneration，ALR)，并完成其分子克隆。Hagiya等報(bào)道的ALRmRNA為12kb，編碼125個(gè)氨基酸組成，分子量約為15kD的蛋白質(zhì)，具有刺激肝細(xì)胞增殖的活性。隨后一些研究發(fā)現(xiàn)在鼠肝組織中用Westernblot可以檢測到2330kD的陽性區(qū)帶，并認(rèn)為這可能與ALR具有同源二聚體結(jié)構(gòu)有關(guān)。近來有研究發(fā)現(xiàn)，ALR實(shí)際上存在13kb和27kb兩種轉(zhuǎn)錄形式，提示可能存在由不同翻譯起始位

3、點(diǎn)致不同翻譯產(chǎn)物的可能性。1996年我國學(xué)者楊曉明等率先克隆出ALR的人類同源分子一肝細(xì)胞生成素(HPO)。人HPO由125個(gè)氨基酸組成，分子量約1x5kD。新近，多個(gè)實(shí)驗(yàn)室報(bào)道了不同的人HPO／ALR／ERVImRNA序列，分析這些序列我們發(fā)現(xiàn)這些序列具有共同的3t端序列，而其5端則長短不一，并且在編碼人HPO起始密碼子ATG前同一閱讀框架不含有任何終止密碼子。提示這些mRNA可能在5端不完整。進(jìn)一步分析人HPO基因組序列發(fā)現(xiàn)在HPO

4、起始密碼子上游同一閱讀框上有另外一個(gè)ATG，、并可形成一個(gè)較大的閱讀框架。這些分析提示我們?cè)隗w內(nèi)可能存在新的HPO形式。、利用5’Race技術(shù)從人胎肝組織中分離一種新形式的肝細(xì)胞生成素(HPO一205)cDNA，其編碼蛋白質(zhì)氨基酸序列的N端較已報(bào)道人肝細(xì)胞生成素|HPO(hepatopoietin)多80個(gè)氨基酸。淇推測蛋白質(zhì)分子量為23kD。RT—PCR檢測。—‘。一’～＼HPOmRNA在多種肝癌細(xì)胞中表達(dá)，Westernblot可檢