SDF-1、CXCR4在db-db小鼠腎臟組織中的表達(dá)及其對近端腎小管上皮細(xì)胞Ⅳ型膠原和纖維連接蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：探討基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1（stromal cell derived factor-1，SDF-1）與趨化因子受體CXCR4在2型糖尿病db/db小鼠腎臟中的表達(dá)及其對大鼠近端腎小管上皮細(xì)胞IV型膠原（type IV collagen）及纖維連接蛋白（fibronectin，F(xiàn)n）表達(dá)的影響。
　　 方法：
　　 1. 8周齡雄性db/db小鼠及其對照雄性C57BL/6小鼠，分為4組，對照組：C57BL/6小鼠，隨機(jī)

2、分為(1)對照組，5只，(2)對照Valsartan（纈沙坦）干預(yù)組；實(shí)驗(yàn)組：db/db小鼠，隨機(jī)分為(1)實(shí)驗(yàn)對照組，5只，(2)實(shí)驗(yàn)Valsartan干預(yù)組，5只。Valsartan 灌胃，40 mg/kg/d。20周后處死動(dòng)物，檢測空腹血糖（fasting plasma glucose，F(xiàn)PG）、24小時(shí)尿白蛋白及尿肌酐清除率（creatinine clearance rate，Ccr）；實(shí)時(shí)熒光定量PCR（real-time P

3、CR）及免疫組織化學(xué)方法檢測SDF-1、CXCR4、HIF-1α及F4/80在小鼠腎臟組織中的表達(dá)；
　　 2. 體外培養(yǎng)大鼠近端腎小管上皮細(xì)胞（NRK細(xì)胞），PCR方法檢測CXCR4受體的表達(dá)；
　　 3. 高濃度葡萄糖、SDF-1、Valsartan及轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）干預(yù)NRK細(xì)胞，real-time PCR方法檢測SDF-1、CXCR4、

4、type IV collagen及Fn mRNA的表達(dá)；
　　 4. SDF-1及磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3-kinase）特異性抑制劑LY294002干預(yù)NRK細(xì)胞，real-time PCR方法檢測TGF-β1的表達(dá)，Weatern blot方法檢測AKT及磷酸化AKT（phospho-AKT，p-AKT）蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1. D

5、b/db小鼠FPG、24小時(shí)尿白蛋白明顯增加，Ccr明顯降低，Valsartan對小鼠血糖無明顯影響，但能顯著降低24小時(shí)尿白蛋白，提高Ccr；
　　 2. SDF-1、CXCR4及F4/80在db/db小鼠腎臟組織表達(dá)明顯增高。Valsartan能顯著降低SDF-1 mRNA的表達(dá)；降低CXCR4 mRNA的表達(dá)，但差異無顯著性；降低F4/80的表達(dá)。HIF-1αmRNA在db/db小鼠腎臟組織的表達(dá)無明顯升高；
　　

6、 3. 瓊脂糖凝膠電泳及免疫組織化學(xué)顯示腎小管上皮細(xì)胞表達(dá)CXCR4受體；
　　 4. 高濃度葡萄糖對NRK細(xì)胞CXCR4 mRNA的表達(dá)無顯著影響，但在干預(yù)3小時(shí)后能增強(qiáng)細(xì)胞SDF-1 mRNA的表達(dá)；
　　 5. TGF-β1增強(qiáng)NRK細(xì)胞 CXCR4 mRNA的表達(dá)，高峰時(shí)間在3小時(shí)；
　　 6. 高濃度葡萄糖干預(yù)NRK細(xì)胞24小時(shí)能增強(qiáng)細(xì)胞type IV collagen和Fn mRNA的表達(dá)；
　

7、　 7. TGF-β1在低糖和高糖環(huán)境中干預(yù)NRK細(xì)胞24小時(shí)能增強(qiáng)細(xì)胞type IV collagen和Fn mRNA的表達(dá)；
　　 8. Valsartan在低糖和高糖環(huán)境中干預(yù)NRK細(xì)胞24小時(shí)能降低細(xì)胞type IV collagen mRNA的表達(dá)，在高糖環(huán)境中能降低Fn mRNA的表達(dá)，但在低糖環(huán)境中不能顯著降低Fn mRNA的表達(dá)；
　　 9. SDF-1在低糖和高糖環(huán)境中干預(yù)NRK細(xì)胞24小時(shí)能降低細(xì)胞

8、type IV collagen及Fn mRNA的表達(dá)，Valsartan和SDF-1起協(xié)同作用；
　　 10. SDF-1在低糖和高糖環(huán)境中干預(yù)NRK細(xì)胞24小時(shí)能抑制TGF-β1升高type IV collagen和Fn mRNA表達(dá)的效應(yīng)，Valsartan和SDF-1起協(xié)同作用；
　　 11. SDF-1α在低糖和高糖環(huán)境中干預(yù)NRK細(xì)胞24小時(shí)能降低TGF-β1 mRNA的表達(dá)，LY294002能抑制SDF-1

9、α下調(diào)TGF-β1 mRNA表達(dá)的效應(yīng)；SDF-1α干預(yù)NRK細(xì)胞后，p-AKT蛋白表達(dá)增加，加入LY294002后抑制SDF-1α誘導(dǎo)的p-AKT蛋白表達(dá)的增加，LY294002單獨(dú)作用對細(xì)胞p-AKT蛋白的表達(dá)無明顯影響。
　　 結(jié)論：2型糖尿病db/db小鼠腎臟組織SDF-1、CXCR4表達(dá)增高，巨噬細(xì)胞浸潤增多，Valsartan能降低SDF-1、CXCR4的表達(dá)和巨噬細(xì)胞的浸潤，改善腎功能；腎小管上皮細(xì)胞表達(dá)CXCR4