腎病患者尿IgG亞類對人近端腎小管上皮細(xì)胞表達(dá)OPN和MIF的影響.pdf

1、 本實驗的目的是：探討不同病理類型腎病患者同一尿IgG亞類對人近端小管上皮細(xì)胞表達(dá)OPN和MIF的影響是否有差異。 材料與方法：分別收集尚未開始腎上腺皮質(zhì)激素和(或)免疫抑制劑治療，經(jīng)臨床和實驗室檢查診斷為原發(fā)性腎小球腎炎，病理類型為膜性腎病和微小病變型的腎病患者的尿液，用硫酸銨鹽析、DEAE-cellulose離子交換層析和葡萄球菌A蛋白(SPA)親和層析等三步分離純化，得到IgG1、IgG2、IgG3、IgG44種亞類

2、，用Westernblot和SDS-PAGE電泳的方法鑒定樣品及其純度?！　》謩e應(yīng)用相同濃度(1.0mg/ml)的已分離純化的膜性腎病和微小病變型的腎病患者尿IgG3、IgG4刺激HK-2細(xì)胞不同時間(0h，1h，6h，12h，24h，48h)，再以不同濃度的IgG3、IgG4刺激HK-2細(xì)胞(觀察蛋白水平表達(dá)刺激24小時，觀察基因水平表達(dá)刺激6小時)，觀察HK-2細(xì)胞受不同劑量不同尿蛋白刺激后OPN和MIF的表達(dá)情況。用RT-PCR

3、的方法檢測細(xì)胞因子的mRNA的表達(dá)水平，用Westernblot的方法檢測細(xì)胞因子的蛋白表達(dá)水平，以觀察IgG3、IgG4刺激HK-2細(xì)胞表達(dá)OPN和MIF的時效關(guān)系和量效關(guān)系。所有計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，根據(jù)方差齊性檢驗結(jié)果組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗。所有數(shù)據(jù)均用SPSS11.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理，P＜0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.01認(rèn)為差異具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論1.腎病患者尿標(biāo)本經(jīng)鹽析、離子層析、親和層析等