正天丸對(duì)藥物代謝酶活性的影響.pdf

1、目的:
　　通過(guò)觀察正天丸對(duì)戊巴比妥鈉及巴比妥鈉催眠作用的影響，了解正天丸對(duì)肝微粒體細(xì)胞色素P450活性有無(wú)抑制作用。進(jìn)一步通過(guò)體外孵育反應(yīng)，研究正天丸對(duì)大鼠肝微粒體細(xì)胞色素P4503A4(CYP3A4)活性的影響，并計(jì)算IC50，結(jié)合體外實(shí)驗(yàn)，研究正天丸對(duì)卡馬西平在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的影響。在以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，測(cè)定正天丸中總香豆素類成分的含量。為臨床藥物相互作用、不良反應(yīng)防治等提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)資料，降低毒副作用和治療成本，

2、保證臨床合理用藥。
　　方法:
　　1.將60只小鼠隨機(jī)分為四組:溶媒對(duì)照組(2％吐溫-80，20mL·kg-1)、陽(yáng)性氯霉素組(25mg·kg-1)及正天丸低、高劑量(3，6 g·kg-1)組，每組15只，連續(xù)等容灌胃3天，末次給藥1h后，再給小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉40mg·kg-1或巴比妥鈉180mg·kg-1，觀察小鼠的睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間。
　　2.制備大鼠肝微粒體，建立體外孵育反應(yīng)體系，以咪達(dá)唑侖(Midaz

3、olam，MDZ)為探針?biāo)?，測(cè)定其代謝產(chǎn)物1'-羥基咪達(dá)唑侖(1'-OH-MDZ)的濃度。孵化反應(yīng)分對(duì)照組、六種濃度的試藥組和陽(yáng)性氯霉素組，對(duì)照組為探針?biāo)幏磻?yīng)，試藥組則是正天丸醇提組分設(shè)六個(gè)濃度，分別為0.625、1.25、2.5、5、10和20mg·L-1。各管加入CYP3A4的探針?biāo)庍溥_(dá)唑侖后進(jìn)行孵育反應(yīng)20min，冰浴中冷卻終止反應(yīng)。用反相高效液相色譜法(RP-HPLC)測(cè)定體外孵育反應(yīng)體系中探針?biāo)幋x物1'-羥基咪達(dá)唑侖的終濃度

4、。根據(jù)各個(gè)濃度的抑制率，求出半數(shù)抑制率(IC50)，判斷正天丸醇提組分對(duì)大鼠肝微粒體CYP3A4活性的抑制作用強(qiáng)弱。
　　3.取健康健Wistar大鼠12只，按體重隨機(jī)分為2組。給藥組給予4g·kg-1正天丸混懸液灌胃，每日1次，連續(xù)5日;對(duì)照組給予等容量生理鹽水。末次灌胃1h后，各組大鼠均給予50mg·kg-1卡馬西平灌胃，于卡馬西平灌胃后0.25、0.5、1、1.5、2、3、5、7、10、15和24h時(shí)尾靜脈取血0.5ml，離

5、心出血漿，用高效液相色譜法測(cè)定各組血樣中卡馬西平的藥-時(shí)血藥濃度，并計(jì)算大鼠體內(nèi)卡馬西平的藥動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
　　4.選用5個(gè)批次的正天丸，提取正天丸中的總香豆素，以歐前胡素為對(duì)照品，采用紫外分光光度法，檢測(cè)波長(zhǎng)為300nm，測(cè)定正天丸中的總香豆素含量。
　　結(jié)果:
　　1.氯霉素組和低、高劑量的正天丸組使戊巴比妥鈉對(duì)小鼠的催眠時(shí)間分別延長(zhǎng)222.2％、123.1％、42.6％，其中氯霉素組和低劑量的正天丸組與溶媒對(duì)照組比

6、較，小鼠的催眠時(shí)間顯著延長(zhǎng)(P＜0.01);正天丸高劑量組對(duì)戊巴比妥鈉的催眠時(shí)間影響小于低劑量組，高劑量組與溶媒對(duì)照組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。氯霉素組和低劑量正天丸組對(duì)巴比妥鈉催眠潛伏期和催眠時(shí)間的影響與溶媒對(duì)照組比較均無(wú)顯著性差異;高劑量正天丸組能顯著延長(zhǎng)巴比妥鈉催眠潛伏期(P＜0.01），并縮短催眠時(shí)間(P＜0.01)。
　　2.空白對(duì)照組中探針?biāo)庍溥_(dá)唑侖的代謝物1'-羥基咪達(dá)唑侖的終濃度為2.62μmol·L-1

7、。六個(gè)濃度的陽(yáng)性對(duì)照藥氯霉素均強(qiáng)烈抑制了1'-羥基咪達(dá)唑侖的生成率，且呈劑量依賴性抑制(P＜0.01）。六個(gè)濃度的正天丸醇提組分對(duì)大鼠肝微粒體CYP3A4活性呈現(xiàn)出不同程度抑制作用，且亦呈劑量依賴性抑制(P＜0.01)。正天丸醇提組分對(duì)CYP3A4活性的IC50值為8.99 mg·L-1。
　　3.兩組卡馬西平主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù):給藥組達(dá)峰時(shí)間Tmax(3.756±1.460)、峰濃度Cmax(13.633±4.20)、藥-時(shí)曲線下面

8、積AUC(183.918±59.640)、消除半衰期T1/2ke(7.362±2.521)、消除速度常數(shù)Ke(0.833±0.850)、體內(nèi)總清除率CL(0.3435±0.144)，表觀分布容積V(3.774±2.095);對(duì)照組Tmax(2.057±1.795)，Cmax(10.250±7.994)、AUC(162.788±18.247)、T1/2ke(5.710±2.677)、Ke(9.352±14.906)、CL(0.6735±0

9、.584)、V(4.885±4.736)。用正天丸處理的給藥組大鼠與對(duì)照組大鼠相比較，卡馬西平的消除速率常數(shù)(Ke）和體內(nèi)總清除率(CL)明顯降低，消除半衰期(T1/2 ke)延長(zhǎng)，曲線下面積(AUC)增加，峰濃度(Cmax)明顯升高，均P＜0.05。
　　4.不同批次的正天丸中總香豆素百分含量依次為1.262±0.033，1.104±0.032，1.288±0.024,1.464±0.036,1.476±0.056。