地西他濱聯(lián)合5-氟尿嘧啶和紫杉醇對胃癌E-cadherin基因甲基化的影響.pdf

1、目的:抑癌基因異常甲基化不僅參與了胃癌的發(fā)生發(fā)展,與胃癌細(xì)胞對化療藥物的敏感性也密切相關(guān)。目前,雖然隨著新的化療藥物的不斷發(fā)展,仍然有眾多胃癌患者因?yàn)閷熕幬锊幻舾卸鴮?dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移,以至于患者生存期縮短及生活質(zhì)量不高。因此,從表觀遺傳學(xué)角度出發(fā),尋求新的胃癌治療分子靶點(diǎn),去甲基化藥物與化療藥物聯(lián)合使用,可能是胃癌患者化療藥物選擇的新方向。為此,探討甲基化抑制劑地西他濱聯(lián)合化療藥物5-氟尿嘧啶和紫杉醇對胃癌SGC-7901細(xì)胞的增殖

2、和凋亡的影響,觀察地西他濱是否能協(xié)同化療藥物抗腫瘤。除此之外,為進(jìn)一步探討地西他濱在體內(nèi)試驗(yàn)中的協(xié)同抗腫瘤作用,建立胃癌裸鼠異體移植瘤模型并觀察地西他濱和化療藥物單獨(dú)或聯(lián)合使用對裸鼠腫瘤體積生長的影響,并檢測未加藥物處理的對照組和各用藥組抑癌基因E-cadherin甲基化狀態(tài)及其表達(dá)情況,以期從分子水平探討甲基化抑制劑地西他濱對化療藥物5-氟尿嘧啶聯(lián)合紫杉醇的協(xié)同抗腫瘤作用機(jī)制。
　　方法:應(yīng)用MTS方法檢測不同濃度梯度的地西他濱

3、組和化療藥物組(5-氟尿嘧啶聯(lián)合紫杉醇)單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用24,48及72h對胃癌SGC-7901細(xì)胞增殖的影響;并采用流式細(xì)胞儀檢測地西他濱單獨(dú)或聯(lián)合化療藥物處理胃癌SGC-7901細(xì)胞72h后對細(xì)胞凋亡的影響。建立胃癌裸鼠異體移植瘤模型,裸鼠瘤體直徑長至5-7mm時(shí),將裸鼠隨機(jī)分為不加任何藥物的對照組、地西他濱組、化療藥物5-氟尿嘧啶聯(lián)合紫杉醇組以及地西他濱聯(lián)合化療藥物組,分組后共觀察7周,每兩天記錄一次裸鼠腫瘤長短徑,計(jì)算裸鼠體積大小

4、。至實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,取裸鼠胃癌組織并采用MSP方法檢測各組抑癌基因E-cadherin甲基化狀態(tài),應(yīng)用RT-PCR方法和Western Blot方法分別檢測E-cadherin基因mRNA和蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果:地西他濱對胃癌SGC-7901細(xì)胞的半數(shù)有效濃度為10.88μM,對胃癌細(xì)胞的抑制作用呈時(shí)間和濃度的依賴性。5-氟尿嘧啶1.92μM聯(lián)合紫杉醇0.15μM在12,24及72h對胃癌細(xì)胞增殖抑制率分別為19.38％,30.3

5、%和42.86%;當(dāng)?shù)匚魉麨I1.67μM聯(lián)合5-氟尿嘧啶289μM及紫杉醇0.1μM時(shí),在12,24及72h對胃癌細(xì)胞增殖抑制率較前兩組均顯著升高,分別為25.64%,66.6%和73.57%(P<0.05)。5-氟尿嘧啶聯(lián)合紫杉醇組作用于胃癌SGC-7901細(xì)胞72h,細(xì)胞凋亡率為32.61%,地西他濱聯(lián)合組腫瘤細(xì)胞凋亡率顯著上升(P<0.05),為62.65%。此外,較化療藥物單獨(dú)使用組相比,地西他濱聯(lián)合組明顯減緩裸鼠胃癌體積的生長