MCL-1反義寡核苷酸對惡性黑素瘤細胞多藥耐藥性影響的研究.pdf

1、目的：惡性黑素瘤是最具危險性的一種皮膚腫瘤，多藥耐藥是其臨床治療失敗的主要原因，化療藥物的主要作用之一是誘導腫瘤細胞凋亡，而抗凋亡基因的過度表達使化療藥物不能發(fā)揮其誘導凋亡的作用，致使惡性黑素瘤臨床治療反應不佳預后差，死亡率居高不下。BCL-2基因家族起調(diào)節(jié)凋亡的作用，其家族成員在結(jié)構(gòu)上具有同源性，哺乳動物細胞中目前已確定了至少15名成員。雖然結(jié)構(gòu)相似，但在功能上卻可分為促凋亡的基因和抑制凋亡的基因。Mcl-1基因又稱髓樣細胞白血病-1

2、(Mcl-1)，是BCL-2家族中的一員，功能上屬于抗凋亡的BCL-2亞家族。反義技術(shù)因其高效、特異、合成簡便的特點，正逐漸成為人們研究腫瘤發(fā)病機制及基因治療腫瘤等的重要研究方法。本實驗通過脂質(zhì)體輔助轉(zhuǎn)染MCL-1反義寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide，AS-ODN)，同時聯(lián)合作用化療藥物，以觀察抑制抗凋亡基因的表達對惡性黑素瘤細胞化療耐藥性的影響。 方法：培養(yǎng)惡性黑素瘤細胞WM45l，在陽離子

3、脂質(zhì)體的輔助下轉(zhuǎn)染MCL-1的反義寡核苷酸利用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(Reversetranscriptionpolymerasechainreaction，RT-PCR)的方法觀察轉(zhuǎn)染前后MCL-1基因表達情況；免疫組化及WesternBlot法檢測腫瘤細胞轉(zhuǎn)染前后MCL-1的蛋白表達情況。電鏡檢測轉(zhuǎn)染后凋亡細胞形態(tài)。流式細胞儀測定轉(zhuǎn)染后細胞的凋亡率。MTT法檢測腫瘤細胞對化療藥物的敏感性及IC50的變化。 結(jié)果：轉(zhuǎn)染MCL-1

4、AS-ODN后2小時，mRNA的表達減少75﹪，轉(zhuǎn)染后4小時，蛋白的表達減少了62﹪。轉(zhuǎn)染MCL-1AS-ODN后，電鏡下可見凋亡細胞，轉(zhuǎn)染后48小時，流式細胞儀檢測顯示ASODN組細胞早期凋亡率(13.6﹪)為對照組(6.3﹪)2倍，正義組(7.3﹪)和無義組(5.26﹪)對細胞凋亡無明顯影響(P＞0.05)。MTT結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染反義核酸組DTIC的IC50值(92.63±¨.54/L)較對照組(152.74±33.08mg/L)顯著降