Notch1對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞“干性”及多藥耐藥性的調(diào)節(jié).pdf

1、目的：
　　1.研究Notch1基因與人神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞“干性”的關(guān)系。
　　2.探討人膠質(zhì)瘤中Notch1信號(hào)與多藥耐藥之間的關(guān)系。
　　方法：
　　1.通過(guò)慢病毒包裝、轉(zhuǎn)染、篩選，分別獲得高表達(dá)NICD的U251細(xì)胞株和Notch1基因敲低的U251細(xì)胞株，并通過(guò)Western Blotting及免疫熒光染色進(jìn)行鑒定。
　　2.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)和比較NICD高表達(dá)和Notch1基因敲低的U251細(xì)胞

2、中CD133+細(xì)胞的比例。
　　3.免疫熒光染色檢測(cè)NICD高表達(dá)和Notch1基因敲低的U251細(xì)胞的Nestin、GFAP的表達(dá)情況。
　　4.腫瘤細(xì)胞球培養(yǎng)，計(jì)算和比較NICD高表達(dá)和Notch1基因敲低的U251細(xì)胞球形成率。
　　5.SCID小鼠致瘤實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)NICD高表達(dá)的U251細(xì)胞的成瘤能力。
　　6.MTT法檢測(cè)上述各組細(xì)胞經(jīng)化療藥物BCNU、VM-26處理后細(xì)胞生存率的變化。
　　7.R

3、hodamine123檢測(cè)各組細(xì)胞藥物外排功能。
　　結(jié)果：
　　1.成功建立了高表達(dá)NICD和Notch1基因敲低的U251細(xì)胞株。
　　2.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示NICD高表達(dá)的U251細(xì)胞中CD133+細(xì)胞率與對(duì)照組相比明顯增高，Notch1基因敲低的U251細(xì)胞中CD133+細(xì)胞率與對(duì)照組相比降低。
　　3.免疫熒光染色結(jié)果顯示，NICD高表達(dá)組細(xì)胞的Nestin熒光強(qiáng)度明顯強(qiáng)于其對(duì)照組，GFAP熒光強(qiáng)度明顯

4、低于其對(duì)照組；而Notch1基因敲低組細(xì)胞的Nestin熒光強(qiáng)度明顯弱于其對(duì)照組，GFAP則明顯強(qiáng)于其對(duì)照組。
　　4.腫瘤干細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果顯示NICD高表達(dá)組細(xì)胞球形成率高于對(duì)照組，Notch1基因敲低組細(xì)胞球形成率低于其對(duì)照組。
　　5.SCID小鼠致瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，NICD高表達(dá)組細(xì)胞的致瘤能力明顯強(qiáng)于對(duì)照組細(xì)胞。
　　6.MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在化療藥物 VM-26（1.5μM）或 BCNU（150μM）作用下，N