β-arrestin2與卒中后交感神經(jīng)活性的相關(guān)性研究.pdf

1、背景：近年來，腦卒中研究取得了令人矚目的成就，然而仍有一些懸而未決的難題，其中備受關(guān)注的就是腦卒中相關(guān)性感染(SAI)。SAI是腦卒中最常見的并發(fā)癥之一，嚴(yán)重影響卒中康復(fù)，增加病死率。目前多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)與臨床證據(jù)表明，SAI與交感神經(jīng)激活后的免疫抑制有關(guān)，但尚不明確交感神經(jīng)激活誘導(dǎo)免疫抑制的具體生物學(xué)機(jī)制，近期研究表明可能與卒中后交感神經(jīng)激活β-arrestin2-NF-κB-HLA-DR通路有關(guān)。β-arrestin2是一種重要的支架蛋白，

2、并且可以作為調(diào)控蛋白參與多種信號(hào)通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)過程。它在免疫器官脾臟組織中高表達(dá)，可以影響免疫功能。在多種細(xì)胞系及動(dòng)物模型中均發(fā)現(xiàn)，交感神經(jīng)激活后β-arrestin2的表達(dá)量顯著增加，同時(shí)促炎細(xì)胞因子表達(dá)下降，發(fā)生了免疫功能抑制。而在腦卒中模型中，β-arrestin2與交感神經(jīng)活性的相關(guān)性尚無報(bào)道。本文提出假設(shè)，腦卒中后可能也是通過交感神經(jīng)-β-arrestin2通路，增加β-arrestin2的表達(dá)，造成免疫功能下降。
　　目的

3、：研究β-arrestin2的表達(dá)與腦卒中后交感神經(jīng)活性的相關(guān)性，初步探討卒中后交感活性調(diào)控免疫功能的分子機(jī)制。
　　方法：采用線栓法制作大腦中動(dòng)脈閉塞(MCAO)模型，利用腹腔注射β受體阻滯藥普萘洛爾阻斷交感神經(jīng)活性。將24只成年雄性Sprague-Dawley大鼠，體重250～300 g，隨機(jī)分為3組:假手術(shù)組(n=8)、MCAO組(n=8)、普萘洛爾干預(yù)組(n=8)。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法測(cè)定大鼠血清3-

4、甲基腎上腺素(MN)和去甲-3-0-甲基腎上腺素(NMN)水平。采用Western Blot法測(cè)定脾臟組織中β-arrestin2的表達(dá)水平，其定量分析采用Image J圖像處理程序進(jìn)行測(cè)定，以目標(biāo)OD值和內(nèi)參OD值的比值來表示β-arrestin2的表達(dá)水平。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。用Shapiro-Wilk檢驗(yàn)（W檢驗(yàn)）對(duì)單組數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，對(duì)符合正態(tài)性分布的數(shù)據(jù)采用獨(dú)立兩樣

5、本t檢驗(yàn)進(jìn)行組間差異的比較，如數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布則采用獨(dú)立兩樣本Mann-Whitney U檢驗(yàn)，各組大鼠脾臟組織
　　β-arrestin2表達(dá)水平與交感神經(jīng)活性指標(biāo)的相關(guān)性采用直線相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：與假手術(shù)組大鼠相比，MCAO組大鼠血清中的MN、NMN水平顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(MN: t=-2.211，P=0.044; NMN: t=-4.210，P=0.001);而普萘洛爾干

6、預(yù)組血清中的MN、NMN水平較MCAO組發(fā)生了顯著下降(MN:t=-4.345，P=0.001; NMN: t=-5.748，P=0.000)。MCAO組與假手術(shù)組相比，脾臟組織中β-arrestin2的表達(dá)水平顯著升高（t=-2.433，P=0.029）;普萘洛爾干預(yù)組脾臟組織中β-arrestin2的表達(dá)較MCAO組發(fā)生了明顯下降(t=4.870，P=0.000)。各組大鼠交感神經(jīng)活性指標(biāo)與脾臟組織中β-arrestin2表達(dá)水平的