金創(chuàng)膏、重組人表皮生長(zhǎng)因子治療糖尿病皮膚難愈性潰瘍的比較研究.pdf

1、目的:通過(guò)建立大鼠糖尿病皮膚潰瘍模型，研究金創(chuàng)膏和重組人表皮生長(zhǎng)因子（recombinant human epidermal growth factor; rhEGF）治療潰瘍時(shí)的療效及具體機(jī)制，及波形蛋白(vimentin; VIM)、基質(zhì)金屬蛋白酶-13(matrix metahoproteinases-1;MMP-13)、盤(pán)狀結(jié)構(gòu)域受體-1（discoidin domain receptor-1;DDR-1）、成纖維細(xì)胞(Fibr

2、oblasts;FB)、Ⅰ型膠原(collagenⅠ;Col-Ⅰ)、Ⅲ型膠原(collagenⅢ; Col-Ⅲ)在糖尿病大鼠潰瘍皮膚中隨時(shí)間的變化，揭示其內(nèi)在聯(lián)系，為治療臨床糖尿病皮膚難愈性潰瘍提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法:1.建立大鼠糖尿病潰瘍模型和分組:經(jīng)普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分成三組，每組16只，實(shí)驗(yàn)組為金創(chuàng)膏組，對(duì)照組為表皮生長(zhǎng)因子組，空白組換藥用生理鹽水。從造模成功開(kāi)始，每天每組分別換藥，各組換藥后均在創(chuàng)面上加蓋一層

3、薄膜，用醫(yī)用膠帶固定，換藥至創(chuàng)面愈合。2.取組織、染色:按規(guī)定時(shí)間在不同組創(chuàng)面取材，甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋組織，HE染色(hematoxylin-eosin staining; HE)觀察成纖維細(xì)胞形態(tài)特征，苦味酸-天狼星紅染色觀察Ⅰ、Ⅲ型膠原面積變化，免疫組化（SABC法）測(cè)定MMP-13、DDR-1、VIM的表達(dá)。3.用IPP6.0(Image-Pro Plus6.0)圖像分析系統(tǒng)測(cè)定MMP-13、DDR-1、VIM的平均光密度值（

4、average optical density; AOD）。4.統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)分析:所得數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，采用spss17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，同一指標(biāo)多組間比較采用單因素方差分析(one-wayANOVA)，組間多重比較采用LSD檢驗(yàn)，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:①動(dòng)物模型觀察結(jié)果:在創(chuàng)面潰瘍愈合的不同時(shí)間段里，觀察創(chuàng)面的顏色、干濕度、肉芽組織生長(zhǎng)狀態(tài)、有無(wú)瘢痕形成，并以創(chuàng)面愈合95％為愈合標(biāo)準(zhǔn)，

5、記錄創(chuàng)面的愈合天數(shù)。結(jié)果顯示剛開(kāi)始三組潰瘍創(chuàng)面愈合無(wú)差異，顏色鮮紅，滲出明顯。隨著時(shí)間的推移，金創(chuàng)膏組潰瘍創(chuàng)面較空白對(duì)照組組織液滲出明顯減少，肉芽組織出現(xiàn)較空白組早，且色澤紅潤(rùn)，創(chuàng)面完全被肉芽組織覆蓋?？瞻捉M則滲出較多，色澤暗紅，肉芽組織生長(zhǎng)較金創(chuàng)膏組晚，且無(wú)法完全覆蓋潰瘍創(chuàng)面。表皮生長(zhǎng)因子組愈合狀況則介于金創(chuàng)膏和空白組之間。最終愈合，金創(chuàng)膏組愈合最快，且瘢痕少，與正常皮膚組織相近，空白組愈合時(shí)間較長(zhǎng)，瘢痕突起于正常皮膚，與正常皮膚組織

6、差別明顯。表皮生長(zhǎng)因子組愈合效果介于金創(chuàng)膏組和空白組之間，瘢痕組織形態(tài)介于金創(chuàng)膏組和空白組之間。②HE染色觀察各組成纖維細(xì)胞排列，肉芽組織生長(zhǎng)情況，金創(chuàng)膏組較表皮生長(zhǎng)因子組較早出現(xiàn)肉芽組織，且成纖維細(xì)胞排列規(guī)則呈“指紋狀”，表皮生長(zhǎng)因子組較空白組早出現(xiàn)肉芽組織?？瞻捉M成纖維細(xì)胞極性消失及膠原纖維排列紊亂，肉芽組織出現(xiàn)較晚。③2周時(shí)苦味酸-天狼星紅染色視野中金創(chuàng)膏組Ⅰ、Ⅲ膠原面積與其他兩組比較，金創(chuàng)膏組Ⅲ型膠原面積最大，表皮生長(zhǎng)因子組次之

7、，空白組面積最小。Ⅰ型膠原面積空白組最大，表皮生長(zhǎng)因子組面積次之，金創(chuàng)膏組面積最小。④免疫組化檢測(cè)第7天和第14天各組中MMP-13、DDR-1、VIM的平均光密度值，圖像分析顯示同時(shí)間各組平均光密度值比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。第7天和第14天前后比較MMP-13、DDR-1、VIM的平均光密度值，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:①金創(chuàng)膏和重組人表皮生長(zhǎng)因子在治療糖尿病難愈性潰瘍時(shí)，可能通過(guò)調(diào)控成纖維細(xì)胞增殖與