姜黃素預(yù)誘導(dǎo)HO-1表達(dá)防治對比劑腎病的實(shí)驗研究.pdf

1、目的：探討應(yīng)用姜黃素(Curcumin,CMN)能否誘導(dǎo)大鼠在體腎內(nèi)血紅素氧合酶-1(Heme Oxygenase-1,HO-1)表達(dá)并籍此有效發(fā)揮防止對比劑腎病(Contrast-induced nephropathy,CIN)的作用。
　　 方法：選用4月齡雄性SD大鼠24只,隨機(jī)均分為對照組(A組)、單純泛影葡胺組(B組)、泛影葡胺+CMN組(C組)、泛影葡胺+CMN+鋅原卟啉Ⅸ(Zinc protoporphyrinⅨ,

2、ZnPPⅨ)組(D組),每組大鼠各6只,實(shí)驗時間為6周。步驟分為:1.建立CIN模型。具體方法是:大鼠先適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,在全麻下均切除右腎,再普通飼料喂養(yǎng)4周,第6周內(nèi)除A組給予普通飼料喂養(yǎng)外,其余三組去鹽飲食喂養(yǎng),各組大鼠都予速尿2mg／kg肌注,每日一次,第6周末在給予泛影葡胺前1h先經(jīng)尾靜脈注入消炎痛10mg／kg,然后分離一側(cè)頸總動脈,B、C、D三組按8mL／kg動脈注入60％泛影葡胺,A組給予等量生理鹽水,代謝籠飼養(yǎng),收集頭

3、24h尿液行尿蛋白定量并于48h后處死動物取血查腎功,評價CIN模型建立效果。2.藥物干預(yù)對HO-1表達(dá)及HO-1活力的影響。于給予泛影葡胺前24h即預(yù)先給C組CMN30mg／kg腹腔注射一次；D組CMN30mg／kg+ZnPPⅨ7.5mg／kg腹腔注射一次；A、B組按C、D組方法給予等量生理鹽水。在給予泛影葡胺48h后處死大鼠,取一部份腎臟組織作western blotting定量HO-1表達(dá)；另一部份腎臟組織用作勻漿測定HO-1活力

4、,即根據(jù)HO-1降解血紅素生成膽紅素的原理,通過測定反應(yīng)體系中膽紅素的生成量以代表HO-1活力。比較不同組間HO-1表達(dá)量及HO-1活力差異。3.誘導(dǎo)及抑制HO-1表達(dá)對CIN的影響及相關(guān)機(jī)制研究。各組大鼠在實(shí)驗結(jié)束時處死,即刻經(jīng)心臟取血行腎功能檢測。取部分腎臟組織行白細(xì)胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、Bax、Bcl-2及細(xì)胞凋亡指

5、數(shù)(AI)等指標(biāo)的檢測,比較不同干預(yù)方法下各項指標(biāo)的變化情況。另取部分腎組織置入10％中性緩沖甲醛液中固定,常規(guī)石蠟包埋、切片、蘇木素伊紅(Hematoxylin and Eosin,HE)染色,光鏡下觀察,比較不同干預(yù)措施對腎臟組織結(jié)構(gòu)的影響。
　　 結(jié)果：1.大鼠CIN模型成功建立。與A組比較,B組的血肌酐(Cr)升高程度符合2007年《造影劑腎病的中國專家共識》臨床實(shí)驗中常用CIN定義:應(yīng)用碘造影劑后48小時內(nèi)血清肌酐水平

6、升高0.5mg／mL(44.2umol／L)或比基礎(chǔ)值升高25％。2.與A組相比,B、C、D組HO-1表達(dá)量均增加。但B、C、D組間比較,C組HO-1表達(dá)量及HO-1活力均顯著升高,其對應(yīng)的腎損傷程度則顯著減輕；D組HO-1表達(dá)量雖與B組相當(dāng)?shù)獺O-1活力卻顯著降低,其對應(yīng)的腎臟損傷程度則顯著加重。3.各組間IL-6、MDA、MCP-1、Bax、Bcl-2及AI等指標(biāo)的比較。B、C、D組較A組均有明顯變化。但B、C、D組間比較,應(yīng)用CM

7、N的C組的IL-6、MDA、MCP-1、Bax及AI顯著低于B組(均為P<0.05),Bcl-2則顯著高于B組(均為P<0.05)；而加用ZnPPⅨ的D組的IL-6、MDA、MCP-1、Bax及AI顯著高于B組(均為P<0.05),Bcl-2則顯著低于B組(均為P<0.05)。
　　 結(jié)論：1.去單腎+去鹽飲食+速尿+消炎痛+泛影葡胺可復(fù)制大鼠CIN模型。2.CMN能顯著誘導(dǎo)大鼠腎臟HO-1表達(dá)并增加HO-1活力,但這種誘導(dǎo)作用