熱量限制及姜黃素對大鼠血清及肝組織HO-1、iNOS水平的影響.pdf

1、目的：熱量限制（caloric restriction，CR）通過降低機(jī)體的能量消耗，可使細(xì)胞水平的氧消耗下降，減少線粒體中活性氧（reactive oxygen species，ROS）產(chǎn)生的速率，從而減緩隨年齡增長而形成的氧化生物大分子如脂類、蛋白質(zhì)以及DNA等在細(xì)胞中的積累，并使降低的DNA修復(fù)功能改善。姜黃中的有效成分姜黃素不僅能夠有效提高SOD、GSH-Px的活性，清除氧自由基，發(fā)揮較強(qiáng)的抗氧化能力，還能通過抑制前列腺素合成、

2、抑制溶酶體酶和琥珀酸脫氫酶活性而具有抗炎活性。血紅素氧合酶（heme oxygenase，HO）是血紅素代謝的限速酶，主要分布在肺臟、肝臟、脾臟、網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)。研究發(fā)現(xiàn)，HO及其代謝產(chǎn)物具有抗氧化應(yīng)激、抗凋亡、調(diào)節(jié)血管張力、抗細(xì)胞增殖等作用。誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）在病理狀態(tài)或氧化應(yīng)激誘導(dǎo)作用下被激活進(jìn)而使NO合成增加，由其合成的NO可直接引起細(xì)胞毒性作用，也可以與過

3、氧化物一起導(dǎo)致過氧化反應(yīng)，引起組織損傷。本課題通過觀察成年SD大鼠進(jìn)食不同熱量水平及含姜黃飼料后血清及肝組織中HO-1及iNOS水平的變化，了解不同熱量水平的飲食以及姜黃素對體內(nèi)HO-1及iNOS表達(dá)的影響，進(jìn)一步探討其對機(jī)體氧化及抗氧化系統(tǒng)的作用，以便為指導(dǎo)健康飲食提供參考依據(jù)。
　　 方法：將清潔級健康雄性成年SD大鼠46只隨機(jī)分為4組：對照組（Ⅰ組）、高熱量飼料組（Ⅱ組）、低熱量飼料組（Ⅲ組）各12只；高熱量+姜黃飼料組（

4、Ⅳ組）10只。各組SD大鼠均自由飲水，并保持主要營養(yǎng)成分一致。喂養(yǎng)90天后，經(jīng)股動脈放血處死，取大鼠血液及肝組織標(biāo)本，提取血清并制作肝組織勻漿及組織切片。采用化學(xué)法檢測肝組織及血清中的HO-1、iNOS含量，免疫組織化學(xué)法檢測肝組織中HO-1蛋白的表達(dá)。采用SPSS11.5軟件包建立數(shù)據(jù)庫，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。所有計(jì)量資料數(shù)均以（x±s）表示，所有資料均先進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)；多組間均數(shù)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)和單因素方差分析；p<0.05，則認(rèn)為差異有

5、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：①體重變化：飼養(yǎng)前各組大鼠體重滿足方差齊性，各組間體重?zé)o顯著性差異（p>0.05）。與對照組相比，1個月末Ⅱ組體重明顯增加，Ⅲ組、Ⅳ組體重增長緩慢，差異均具有顯著性（p<0.05）；2個月末Ⅱ組體重增加，但無顯著差異，Ⅲ組、Ⅳ組體重增長緩慢，差異均具有顯著性（p<0.05）；3個月末Ⅱ組體重增加，但無顯著差異，Ⅲ組、Ⅳ組體重增長緩慢，差異均具有顯著性（p<0.05）。②各組血清及肝組織HO-1水平比較：

6、與對照組相比，Ⅳ組大鼠血清及肝組織HO-1水平明顯升高，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；Ⅲ組肝組織HO-1水平明顯升高（p<0.05），血清HO-1水平無明顯變化（p>0.05）；Ⅱ組大鼠血清及肝組織HO-1水平有所升高，但無顯著性差異（p>0.05）。Ⅳ組大鼠血清HO-1水平較Ⅲ組明顯升高，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。而Ⅲ組、Ⅳ組大鼠肝組織HO-1水平較Ⅱ組增高，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。③各組血清及肝組織iNO

7、S水平比較：與對照組相比，Ⅱ組大鼠血清iNOS水平明顯升高，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），而肝組織iNOS水平有所升高，但其差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）；Ⅲ組大鼠血清iNOS水平降低，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），而肝組織iNOS水平無明顯變化（p>0.05）；Ⅳ組大鼠血清及肝組織iNOS水平亦無明顯變化（p>0.05）。與Ⅱ組大鼠相比，Ⅲ組及Ⅳ組大鼠血清iNOS水平明顯降低，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），肝組織i

8、NOS水平無明顯差異（p>0.05）。④免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果顯示，Ⅲ組、Ⅳ組大鼠肝組織HO-1表達(dá)明顯，分布均勻；對照組及Ⅱ組大鼠肝組織HO-1表達(dá)不明顯。
　　 結(jié)論：①通過熱量限制或添加姜黃，能夠誘導(dǎo)體內(nèi)HO-1的表達(dá)水平升高。②高熱量飲食可誘導(dǎo)體內(nèi)的iNOS表達(dá)水平升高，而抗氧化劑姜黃素與熱量限制均能抑制iNOS的表達(dá)，進(jìn)而降低由其介導(dǎo)的NO合成。③通過熱量限制或者食物中添加抗氧化劑是否也能抑制人體內(nèi)自由基的產(chǎn)生，增強(qiáng)體內(nèi)