T24-ADM原位膀胱癌多藥耐藥模型的建立.pdf

1、第一部分人膀胱癌T24/ADM耐藥細(xì)胞的建立
　　 目的：建立人膀胱癌T24/ADM細(xì)胞耐藥模型并初步檢測其耐藥性。
　　 方法：以人膀胱癌T24細(xì)胞為親本細(xì)胞，采用阿霉素(ADM)低濃度梯度誘導(dǎo)細(xì)胞耐藥。倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化及生長情況，MTT法檢測細(xì)胞對藥物的耐受性，RT-PCR檢測mdr-1的mRNA表達(dá)。
　　 結(jié)果：阿霉素低濃度梯度誘導(dǎo)3個(gè)月后建立了耐藥細(xì)胞系。T24/ADM耐藥細(xì)胞在形態(tài)上比親本

2、細(xì)胞略有增大，對ADM的耐受性增高，同濃度ADM作用下T24/ADM比T24細(xì)胞存活多，組間差異具顯著性，P＜0.01。T24/ADM細(xì)胞RT-PCR檢測mdr-1的mRNA表達(dá)顯著增高，T24表達(dá)不明顯，差異具有顯著性，P＜0.01。
　　 結(jié)論：阿霉素低濃度梯度法建立的T24/ADM細(xì)胞系具有多藥耐藥性，其耐藥機(jī)制主要與mdr-1基因表達(dá)有關(guān)。
　　 第二部分胰酶法和鹽酸法對原位膀胱癌模型建立的影響
　　 目

3、的：比較胰酶法和鹽酸法兩種不同的膀胱粘膜損傷方法對細(xì)胞移植法原位膀胱癌模型建立的影響及優(yōu)缺點(diǎn)。
　　 方法：4-6周齡裸鼠兩組，每組10只。麻醉后經(jīng)尿道置入膀胱靜脈留置針，導(dǎo)尿后一組注入100ul10％胰酶保留30min，另一組注入100ul0.1mol·L-1Hcl15s，PBS沖洗后將濃度為1×107L-1的人膀胱癌T24細(xì)胞懸液注入兩組鼠膀胱保留1-2h。另設(shè)一組5只導(dǎo)尿沖洗后直接注入細(xì)胞保留1-2h。定期觀察裸鼠一般情況

4、。28d后斷頸處死，解剖觀察膀胱成瘤及轉(zhuǎn)移情況，并取膀胱及可疑腎臟行病理學(xué)檢查。
　　 結(jié)果：胰酶破壞組到2w有2只間斷出現(xiàn)淡紅色血尿，下腹腫塊不明顯。到28d后處死，肉眼2只成瘤，約占膀胱50％以上。病理檢查證實(shí)成瘤2只，多局限于粘膜，未突破肌層。鹽酸破壞組約12d開始出現(xiàn)血尿，其中4只可及下腹腫塊，2只于2d死亡。到28d處死，共8只大體成瘤，2只見右腎腫大。病理檢查示8只成瘤，細(xì)胞結(jié)構(gòu)紊亂，未突破漿膜層，兩只腎轉(zhuǎn)移。未行粘

5、膜破壞組無明顯變化，也無瘤形成。
　　 結(jié)論：胰酶破壞膀胱粘膜對動物損傷輕，但成瘤率低；鹽酸破壞粘膜對動物損傷稍大，但成瘤率滿意，在細(xì)胞移植法建立原位膀胱癌模型可明顯提高成瘤率。
　　 第三部分T24/ADM原位膀胱癌多藥耐藥模型的建立及初步檢測
　　 目的：建立模擬人的原位膀胱癌多藥耐藥模型并行耐藥性初步檢測。
　　 方法：采用細(xì)胞移植法將T24/ADM耐藥株及T24細(xì)胞敏感株移植到兩組裸鼠膀胱后定期觀

6、察其下腹及一般情況。28d后處死裸鼠稱成瘤膀胱重量，測體積，行組織病理學(xué)和細(xì)胞學(xué)檢測，RT-PCR測mdr1的表達(dá)，并將瘤組織制成細(xì)胞懸液用MTT法測其耐藥性。
　　 結(jié)果：兩組裸鼠膀胱的成瘤率分別為80％(8/10)和90％(9/10)，耐藥組成瘤約晚敏感組2-3d，空白組無腫瘤形成。兩組重量和體積分別為：(0.8±0.3)g，(1.0±0.5)g;(875±158)mm3，(903±192)mm3，組間比較差異無顯著性(P＞

7、0.05)。組織病理學(xué)檢測：T24/ADM組有4只出現(xiàn)右腎增大，T24細(xì)胞組有兩只裸鼠出現(xiàn)右腎腫大，約1.0×1.8cm，色暗灰到暗紅。兩組膀胱腫瘤組織切片見細(xì)胞結(jié)構(gòu)排列較亂，胞體形態(tài)不規(guī)則，向肌層不同深度浸潤，未突破將膜層，兩組間差異不明顯。RT-PCR測mdr1表達(dá)兩組間差異有顯著性(P＜0.01)。MTT檢測耐藥組裸鼠腫瘤細(xì)胞較敏感組對ADM有明顯的耐藥性(P＜0.01)，且對其它幾種藥物也有耐藥性(P＜0.01)。