MicroRNA-545抑制肺癌細(xì)胞增殖機(jī)制.pdf

1、微小RNA(miRNAs)是一類大約22個堿基長的非編碼RNA。miRNA通過與mRNA的3'UTR結(jié)合類抑制mRNA翻譯或造成mRNA降解。越來越多的研究已經(jīng)證明miRNA參與細(xì)胞的增殖，分化和凋亡等生物過程。因此miRNA的異常表達(dá)與癌癥有關(guān)。
　　肺癌是目前致死率最高的癌癥，越來越多的報道證明腫瘤的發(fā)生和發(fā)展與miRNA相關(guān)，考慮到人基因組中存在許多miRNA，我們決定在肺癌病人的腫瘤組織和正常非組織中檢測miRNA表達(dá)譜。

2、我們發(fā)現(xiàn)共有31個miRNA呈低表達(dá)。為了進(jìn)一步確認(rèn)這些miRNA在肺癌細(xì)胞增殖中的作用，我們進(jìn)行了第二輪篩選，將這些miRNA轉(zhuǎn)染肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549和H460，我們發(fā)現(xiàn)miR-545能夠顯著地抑制A549和H460細(xì)胞增殖。于是我們研究miR-545抑制細(xì)胞增殖的機(jī)制。我們同過EdU摻入實驗發(fā)現(xiàn)miR-545能夠抑制細(xì)胞DNA合成。因此我們認(rèn)為miR-545有可能影響細(xì)胞周期。我們通過細(xì)胞周期檢測發(fā)現(xiàn)miR-545能夠引起細(xì)胞周期阻滯

3、在G0/G1期。此外，我們還發(fā)現(xiàn)miR-545在A549細(xì)胞中能夠促進(jìn)細(xì)胞的凋亡。
　　進(jìn)而我們研究了miR-545造成細(xì)胞周期阻滯的機(jī)制。我們使用targetscan預(yù)測miR-545靶基因，發(fā)現(xiàn)與細(xì)胞周期相關(guān)的cyclin D1和CDK4是miR-545的靶基因。我們發(fā)現(xiàn)miR-545能在A549和H460細(xì)胞系中抑制cyclin D1和CDK4的翻譯，而在HFL1細(xì)胞系中，抑制miR-545可以促進(jìn)cyclin D1和CDK

4、4表達(dá)。另外雙報告實驗表明miR-545通過結(jié)合cyclin D1和CDK4的3'UTR來抑制這兩個基因的翻譯。這說明cyclin D1和CDK4是miR-545的靶基因。另外我們通過siRNA抑制cyclin D1和CDK4，引起細(xì)胞增殖抑制，細(xì)胞周期阻滯在G1期，并造成細(xì)胞凋亡。這說明miR-545是通過抑制cyclin D1和CDK4的表達(dá)來抑制細(xì)胞增殖的。
　　另外我們還發(fā)現(xiàn)miR-545基因的啟動子區(qū)域含有CpG島，這意