MicroRNA-7靶定XIAP抑制宮頸癌細(xì)胞的增殖和促進(jìn)細(xì)胞的凋亡.pdf

1、[研究目的]微小RNA(microRNA，miRNA)是一類(lèi)長(zhǎng)度約19-25nt的小分子非編碼RNA，通過(guò)負(fù)性調(diào)節(jié)其靶基因的表達(dá)水平參與多種生理、病理過(guò)程。近年的研究表明，許多miRNA具有癌基因或抑癌基因活性，在腫瘤發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用。前期我們用Real Time PCR發(fā)現(xiàn)在與正常癌旁組織相比人宮頸癌組織中miR-7表達(dá)水平發(fā)生明顯下調(diào)。在上述基礎(chǔ)上，本研究旨在深入研究miR-7對(duì)HeLa和C-33A細(xì)胞生長(zhǎng)表型的影響，進(jìn)

2、一步確定miR-7直接作用的靶基因，從而闡明miR-7在宮頸癌發(fā)生和發(fā)展中作用的可能分子機(jī)制。
　　 [研究方法]在宮頸癌細(xì)胞中過(guò)表達(dá)miR-7，利用MTT、細(xì)胞集落形成及凋亡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖和凋亡的變化。之后綜合利用生物信息學(xué)方法和BLAST方法預(yù)測(cè)出miR-7的候選靶基因，并利用熒光報(bào)告載體實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-7對(duì)其靶基因的直接調(diào)控作用。通過(guò)Real-time PCR和Western blot技術(shù)檢測(cè)宮頸癌HeLa和C-33A細(xì)

3、胞過(guò)表達(dá)miR-7后靶基因mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)變化，進(jìn)一步確定miR-7對(duì)靶基因的調(diào)控作用。最后，用過(guò)表達(dá)質(zhì)粒或敲降質(zhì)粒改變XIAP的表達(dá)水平后，利用MTT實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞集落形成實(shí)驗(yàn)和TUNEL實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖和凋亡的變化，進(jìn)一步研究靶基因的功能。
　　 [研究結(jié)果]在宮頸癌HeLa和C-33A細(xì)胞中，過(guò)表達(dá)miR-7后，細(xì)胞活性均明顯受抑制，并且集落形成能力和生長(zhǎng)能力均明顯降低，在HeLa細(xì)胞中過(guò)表達(dá)miR-7細(xì)胞凋亡增加

4、。靶基因篩選結(jié)果表明，XIAP(X-linked inhibitor of apoptosisprotein)3'UTR區(qū)包含miR-7的潛在結(jié)合位點(diǎn)。熒光報(bào)告載體實(shí)驗(yàn)表明miR-7能夠通過(guò)作用于XIAP基因的3'UTR區(qū)的特定位點(diǎn)對(duì)其表達(dá)進(jìn)行負(fù)性調(diào)節(jié)。而在miR-7過(guò)表達(dá)的HeLa和C-33A細(xì)胞中，XIAP基因的mRNA表達(dá)水平和蛋白表達(dá)水平都有明顯下降。沉默HeLa和C-33A細(xì)胞中XIAP基因的表達(dá)后，細(xì)胞活性及增殖能力均明顯受