蜜柚苦味物的HPLC檢測(cè)、提取及脫苦菌株的篩選.pdf

1、本研究的主要目的是獲得產(chǎn)脫除蜜柚中三種主要苦味物(柚皮苷、檸檬苦素和諾米林)的代謝酶菌株，進(jìn)而獲得可用于蜜柚果汁脫苦的酶制劑，為酶法脫苦生產(chǎn)無(wú)苦味的蜜柚果汁及其深加工產(chǎn)品提供前期基礎(chǔ)。而建立苦味物質(zhì)的檢測(cè)方法及提取獲得苦味物質(zhì)是進(jìn)行菌種篩選及相關(guān)研究的必要條件。本論文從苦味物質(zhì)分析方法的研究入手，建立了蜜柚苦味物質(zhì)的HPLC方法，在此基礎(chǔ)上優(yōu)化了蜜柚苦味物質(zhì)的提取方法并以蜜柚苦味物為選擇性成分篩選了苦味物質(zhì)分解菌株，主要研究結(jié)果如下：

2、 (1)通過對(duì)流動(dòng)相、PH值、溶劑比例及柱溫等色譜條件的優(yōu)化，得到琯溪蜜柚中主要的天然的苦味物(柚皮苷，檸檬苦素和諾米林)的HPLC檢測(cè)條件為：色譜柱為SymmetryC18柱，流動(dòng)相是甲醇：乙腈：磷酸緩沖液(0.01mol/L pH3.5)=9：3：8(V/V)，流速1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)210nm，柱溫35℃. (2)柚皮苷、檸檬苦素和諾米林分別在1.80～115gg/mL，4.30～137.5μg/mL和5.8

3、2～186.25μg/mL范圍內(nèi)所建立的高效液相色譜檢測(cè)體系有良好的線性關(guān)系，R<'2>值分別為0.999，0.9968和0.9993；檢測(cè)限分別為0.3196μg/mL，2.295μg/mL，2.7541μg/mL；加樣回收率分別為97.80％(RSD=1.86)，95.32％(RSD=2.04)和98.54％(RSD=3.17)；高效、準(zhǔn)確、重復(fù)性好。 (3)琯溪蜜柚成熟果實(shí)中不同部位其苦味物的含量不同，柚皮苷的含量分布為：

4、囊衣>白皮層>油胞層>果肉，檸檬苦素的含量分布為：囊衣>油胞層>果肉>白皮層，諾米林的含量分布為：囊衣>果肉，白皮層和油胞層的含量在檢測(cè)限以下，囊衣中三種苦味物含量都是最高的，分別為976.13(μg/g原料)，860.46(μg/g原料)，351.83(μg/g原料)。 (4)對(duì)琯溪蜜柚成熟果實(shí)中主要苦昧物(柚皮苷、檸檬苦素、諾米林)的提取的工藝進(jìn)行研究，優(yōu)化的工藝條件為：囊衣粉用石油醚于索氏提取器中徹底脫脂，再加入20倍(體

5、積/質(zhì)量)丙酮于40℃、pH7.0浸提15h，所得苦味物的總量可達(dá)3467.71(μg/g原料)，其中柚皮苷2425.97(μg/g原料)，檸檬苦素716.63(μg/g原料)，諾米林325.11(μg/g原料)。 (5)脫苦酶產(chǎn)生菌株的篩選：以苦味物濃縮物為唯一碳源配制培養(yǎng)基，經(jīng)富集、平板分離、初篩后獲得324株菌株，用試管培養(yǎng)、液相色譜儀分析苦昧物質(zhì)含量的方法復(fù)篩出綜合脫苦酶分解菌株106株，柚皮苷分解菌株128株，檸檬苦素