PCOS大鼠子宮內(nèi)膜生存素、Ki67、環(huán)氧合酶-2的表達(dá)及二甲雙胍對(duì)其影響的研究.pdf

1、目的：
　　研究對(duì)象為來曲唑誘導(dǎo)的多囊卵巢綜合征（Polycysticovarysyndrome,PCOS）大鼠模型，觀察增殖與凋亡因子生存素(Survivin)、Ki67核抗原(Ki67)、環(huán)氧合酶-2(COX-2)在多囊卵巢綜合征（PCOS）大鼠子宮內(nèi)膜的局部表達(dá)，分析三種因子與PCOS患者子宮內(nèi)膜病變的關(guān)系。并觀察應(yīng)用胰島素增敏劑二甲雙胍后PCOS大鼠子宮內(nèi)膜組織中Survivin、Ki67、COX-2表達(dá)的變化，探討其對(duì)P

2、COS患者子宮內(nèi)膜病變的治療作用并進(jìn)一步分析可能的作用機(jī)制。
　　方法：
　　55只6周齡雌性Wistar大鼠，以體重及窩別分為兩組，模型組40只，對(duì)照組15只，用非甾體類芳香化酶抑制劑（來曲唑）誘導(dǎo)建模。大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3日后，每天取陰道分泌物涂片，行巴氏染色后光鏡下觀察動(dòng)情周期的變化。喂養(yǎng)21天后，從40只模型組大鼠中隨機(jī)抽取10只進(jìn)行檢測(cè)造模的成功率。用動(dòng)情周期的改變和卵巢形態(tài)多囊樣改變?cè)u(píng)估PCOS模型的復(fù)制情況。當(dāng)成功

3、率>80％時(shí)，將模型組剩余的30只大鼠再次依窩別和體重分成二甲雙胍干預(yù)組15只和PCOS組15只。干預(yù)組給予二甲雙胍270mg/(kg·d)用生理鹽水溶解后灌胃；給予PCOS組和對(duì)照組等量生理鹽水。14天后各組大鼠進(jìn)行口服葡萄糖耐量試驗(yàn)（OGTT），血糖儀測(cè)定空腹血糖（FPG）、服糖后1h血糖(1hPG)、服糖后2h血糖（2hPG），采用放射免疫法（RIA）測(cè)定各組大鼠血清空腹胰島素(FIN)值。然后稱重并解剖大鼠，打開腹腔摘取卵巢、Y

4、型子宮，去除脂肪組織后稱重，仔細(xì)觀察其有無形態(tài)變化，然后固定、包埋。組織切片后HE染色光鏡下觀察組織學(xué)改變，部分切片用于免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)，在顯微鏡下觀察各組大鼠子宮內(nèi)膜組織中Survivin、Ki67、COX-2的表達(dá)，并采用圖像分析儀獲取三種因子表達(dá)的灰度值。
　　結(jié)果：
　　1.動(dòng)情周期的改變：應(yīng)用來曲唑12天后模型組大鼠動(dòng)情周期失去規(guī)律性，提示無排卵；對(duì)照組存在規(guī)律的動(dòng)情周期。
　　2.卵巢、Y型子宮的解剖學(xué)改變

5、：卵巢變化：肉眼觀察可見對(duì)照組卵巢表面色紅，較PCOS組體積也明顯小，其卵巢重量明顯低于PCOS組(P<0.05)；PCOS組可見明顯增大且表面蒼白的卵巢，仔細(xì)觀察可發(fā)現(xiàn)包膜下擴(kuò)張的卵泡。干預(yù)組卵巢表面顏色蒼白，體積較PCOS組縮小，與對(duì)照組無明顯區(qū)別，重量較PCOS組減輕(P<0.05)，未觀察到包膜下擴(kuò)張的卵泡。子宮變化：Y型子宮大體形態(tài)各組無明顯區(qū)別。
　　3.卵巢、子宮內(nèi)膜的組織學(xué)變化：卵巢變化：PCOS組未見成熟的卵泡，

6、卵泡囊性擴(kuò)張，部分卵泡內(nèi)卵母細(xì)胞或放射冠消失；與對(duì)照組比卵泡膜細(xì)胞層明顯增加，顆粒細(xì)胞層顯著減少并排列疏松。干預(yù)組有成熟卵泡，較PCOS組卵泡膜細(xì)胞層減少，顆粒細(xì)胞層數(shù)增加，黃體數(shù)量也顯著增多。光鏡下觀察各組大鼠的子宮內(nèi)膜，可見腺體形態(tài)差異顯著。對(duì)照組子宮內(nèi)膜腺體為多個(gè)簇狀排列，腺腔大而多皺褶。PCOS組子宮內(nèi)膜腺體數(shù)目明顯減少，多為單個(gè)腺體分散存在，腺腔則小而直，無明顯皺褶。干預(yù)組子宮內(nèi)膜腺體數(shù)目較PCOS組增多，可見簇狀排列，但腺腔

7、多小而直，部分可皺褶出現(xiàn)。
　　4.OGTT及FIN水平：PCOS組血清FIN水平、FPG、1hPG、2hPG顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；干預(yù)組血清FIN水平、FPG、2hPG顯著低于PCOS組(P<0.05).
　　5.PCOS組大鼠子宮內(nèi)膜腺上皮和間質(zhì)中Survivin、Ki67、COX-2表達(dá)均明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。干預(yù)組的三種因子表達(dá)較PCOS組顯著降低(P<0.05)，與對(duì)照組相比仍高（P>0.05）