阿利克侖對(duì)AGT-REN雙轉(zhuǎn)基因高血壓小鼠腎損傷的作用研究.pdf

1、目的：腎素-血管緊張素系統(tǒng)（Renin-angiotensin system，RAS）失調(diào)在高血壓及高血壓腎臟損傷的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。腎素（renin）是啟動(dòng) RAS第一步的限速酶，對(duì) RAS的活化有至關(guān)重要的作用。本研究通過(guò)觀察阿利克侖（Aliskiren）對(duì)人血管緊張素原-腎素（Angiotensinogen-renin，AGT-REN）雙轉(zhuǎn)基因高血壓小鼠血壓、腎損傷指標(biāo)以及循環(huán)和腎臟局部 RAS成分表達(dá)的變化，探討非肽類腎素抑

2、制劑阿利克侖對(duì)高血壓及腎臟損傷的影響及其作用機(jī)制。
　　方法：1動(dòng)物分組及給藥方法：12只10月齡雄性AGT-REN雙轉(zhuǎn)基因高血壓小鼠隨機(jī)分為高血壓對(duì)照組（HT組）和阿利克侖治療組（HT+Aliskiren組），每組6只，另選擇背景相同的6只野生型C57B6雄性小鼠作為正常對(duì)照組（WT）。給藥方法：?jiǎn)未谓o藥采用灌胃經(jīng)口途徑，分別給予5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg阿利克侖，監(jiān)測(cè)給藥后24h內(nèi)血壓；持續(xù)給藥通過(guò)皮下埋置微

3、量滲透泵，以20mg/kg/d對(duì)HT+Aliskiren組小鼠給予阿利克侖處理28d，其余兩組給予生理鹽水作為空白對(duì)照，期間監(jiān)測(cè)血壓，28d后取材，進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)。2動(dòng)脈血壓監(jiān)測(cè)：采用無(wú)創(chuàng)尾套法測(cè)量各組小鼠在清醒與安靜狀態(tài)下給藥前后的平均動(dòng)脈壓（MAP），觀察阿利克侖單次給藥后24h內(nèi)血壓以及持續(xù)給藥28d內(nèi)隔日血壓的變化。3腎功能損傷指標(biāo)檢測(cè)：①考馬斯亮藍(lán)（CBB）結(jié)合法測(cè)定24h尿蛋白含量；②全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清肌酐、尿素；③

4、光鏡（HE、Masson染色）和電鏡觀察腎臟組織病理形態(tài)改變。4氧化應(yīng)激反應(yīng)指標(biāo)檢測(cè)：化學(xué)發(fā)光法測(cè)定腎組織勻漿超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量以及蛋白免疫印跡法（Western blot, WB）檢測(cè)腎組織 p47phox蛋白表達(dá)變化。5 RAS成分表達(dá)變化檢測(cè)：ELISA法測(cè)定血清和腎組織勻漿AngⅡ和Ang(1-7)含量；WB檢測(cè)腎組織ACE、ACE2蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：1阿利克侖的降壓效果：與 WT小鼠比

5、較，HT組小鼠 MAP明顯升高；單次和持續(xù)給藥實(shí)驗(yàn)均顯示，HT+Aliskiren組小鼠MAP均較HT組明顯降低。2 HT小鼠24h尿蛋白、血清尿素、肌酐均較 WT小鼠明顯升高；在 HT+Aliskiren組小鼠上述腎功能損傷指標(biāo)較HT組明顯降低。3病理形態(tài)學(xué)結(jié)果顯示：光鏡下HT組小鼠腎臟實(shí)質(zhì)厚度較WT組明顯變薄，HT+Aliskiren組上述病理?yè)p傷得到改善。與WT小鼠比較，HT組小鼠腎小球硬化面積評(píng)分和腎間質(zhì)損傷評(píng)分明顯增加，HT+

6、Aliskiren組評(píng)分結(jié)果較 HT組降低。電鏡下，HT小鼠腎小球基底膜增厚，足突融合甚至消失，腎小管上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)線粒體水腫、空泡變性，間質(zhì)可見(jiàn)大量膠原纖維沉積，；HT+Aliskiren組小鼠腎臟上述病變較HT組明顯減輕。4與WT小鼠比較，HT小鼠腎臟組織SOD活性降低，MDA生成增加，p47phox蛋白表達(dá)明顯增多；與HT組小鼠比較，HT+Aliskiren組小鼠腎臟組織SOD活性增加，MDA的生成減少，p47phox蛋白表達(dá)明顯

7、減少。5與 WT組比較，HT組小鼠 ACE蛋白表達(dá)增加，ACE2蛋白表達(dá)下降，AngⅡ/ Ang(1-7)比值增加；與HT組小鼠相比，阿利克侖可下調(diào) HT小鼠腎組織 ACE蛋白表達(dá)，上調(diào) ACE2表達(dá)，降低血漿和腎組織AngⅡ/Ang(1-7)比值。
　　結(jié)論：1阿利克侖具有良好的降壓效果及腎臟保護(hù)作用。2阿利克侖通過(guò)抑制AngⅡ的生成，降低腎臟局部 AngⅡ/ Ang(1-7)比值，維持腎臟局部 RAS穩(wěn)態(tài)平衡。3腎素抑制劑從源