親和層析-酶聯(lián)免疫吸附法檢測β-,2--興奮劑的研究.pdf

1、本研究采用混合酸酐法制備萊克多巴胺(Ractopamine，RCT)免疫抗原和沙丁胺醇(Salbutamol，SAL)免疫抗原，經(jīng)鑒定RCT免疫抗原(RCT-BSA)的偶聯(lián)比率為25.8∶1，包被抗原(RCT-OA)的偶聯(lián)比率為48.41∶1，SAL免疫抗原(SAL-BSA)的偶聯(lián)比率為12.8∶1，包被抗原(SAL-OA)的偶聯(lián)比率為18.7∶1。采用重氮化法制備克倫特羅(Clenbuterol，CL)免疫抗原，CL免疫抗原(CL-B

2、SA)的偶聯(lián)比率為24.21∶1，包被抗原(CL-OA)的偶聯(lián)比率為13.63∶1。 利用制備好的抗原免疫家兔，獲得抗RCT抗血清，抗CL抗血清，抗SAL抗血清，以制備相應的多克隆抗體。采用間接酶聯(lián)免疫吸附檢測法(ELISA)對抗血清效價進行了檢測，抗RCT抗血清，抗CL抗血清，抗SAL抗血清最高效價分別為1∶32000，1∶16000，1∶16000。經(jīng)鑒定三種抗血清的特異性較高和與各自抗原同系物的交叉反應率也很低。在優(yōu)化包被

3、抗原濃度，封閉條件，抗體和酶標二抗的濃度，顯色時間等條件的基礎上，采用間接競爭ELISA法建立檢測RCT，CL，SAL的標準曲線，三者分別在0.55ng/mL-1.21μg/mL、2.71ng/mL-0.66μg/mL、1.48ng/mL-3.24μg/mL濃度范圍之間，呈良好的線性相關，RCT、CL、SAL的最小檢測極限0.55ng/mL、2.71ng/mL、1.48ng/mL。將各抗原以1，10，100ng/g的濃度添加時，豬肉組織

4、，豬尿液中的回收率在78.33％-119％范圍內(nèi)。在間接競爭ELISA方法的基礎上，制備了RCT，CL，SAL間接競爭酶聯(lián)免疫吸附檢測技術，可用于檢測動物肌肉組織、尿液中RCT，CL，SAL的殘留量。 為進一步降低檢測限，在間接競爭ELISA的基礎上，利用抗RCT抗體，抗CL抗體，抗SAL抗體制備免疫親和層析柱(IAC)，先將樣品中RCT，CL，SAL富集，再進行間接競爭ELISA檢測，建立了檢測RCT，CL，SAL留的親和層析