多重PCR方法檢測艱難梭菌毒素A基因(tcdA)、毒素B基因(tcdB)和二元毒素基因(cdtA-cdtB).pdf

1、目的：探討同時(shí)檢測艱難梭菌毒素A基因，毒素B基因和二元毒素基因的多重PCR方法，研究臨床分離的艱難梭菌的毒素基因類型。
　　方法：根據(jù)美國2010年艱難梭菌感染臨床實(shí)踐指南的標(biāo)準(zhǔn)，選取住院的腹瀉患者；收集2013年6月至2014年5月期間，北京協(xié)和醫(yī)院的160例住院腹瀉患者的糞便標(biāo)本，用艱難梭菌選擇性培養(yǎng)基 CCFA分離培養(yǎng)艱難梭菌；用VITEK-MS質(zhì)譜儀進(jìn)行菌種鑒定；采用酶免夾心與終點(diǎn)熒光檢測相結(jié)合技術(shù)（ELFA），檢測這些糞

2、便標(biāo)本中艱難梭菌毒素A/B，并分析其毒素特征；將艱難梭菌純培養(yǎng)出的菌落用多重PCR方法測定艱難梭菌的毒素A基因、毒素B基因和二元毒素基因。
　　結(jié)果：收集的160例腹瀉患者糞便標(biāo)本中，分離培養(yǎng)出37株艱難梭菌，細(xì)菌分離率達(dá)23.1％。33例糞便標(biāo)本檢測艱難梭菌A/B毒素陽性，其中28例分離培養(yǎng)并鑒定出艱難梭菌；127例檢測艱難梭菌A/B陰性的糞便標(biāo)本中，有9例分離培養(yǎng)并鑒定出艱難梭菌。應(yīng)用免疫學(xué)方法檢測毒素檢出率為75.68%（2

3、8/37）。用多重PCR方法，在37株分離的艱難梭菌中，36株檢出A/B毒素基因，檢出率為97.3%，基因呈2種分布類型：35株含 tcdA+，tcdB+，cdtA-?cdtB-；1株含tcdA+，tcdB+，cdtA+?cdtB+。
　　結(jié)論：本研究中分離的艱難梭菌多為產(chǎn)毒株；多重PCR方法可以快速地一步篩選艱難梭菌的毒素基因：毒素A基因，毒素B基因和二元毒素基因，毒素基因型主要是tcdA+，tcdB+，cdtA-?cdtB-，