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1、本研究首先克隆了小鼠血清白蛋白基因啟動(dòng)子(ALBgenepromoter,Palb)與增強(qiáng)子(ALBgeneenhancer,Ealb),構(gòu)建了受其調(diào)控的5種表達(dá)載體,然后在細(xì)胞水平分析比較載體的轉(zhuǎn)錄活性或殺傷能力,選擇出了細(xì)胞水平活性較高的載體進(jìn)行轉(zhuǎn)基因小鼠雄原核顯微注射,獲得了目的基因HSV-tk整合與特異表達(dá)的轉(zhuǎn)基因小鼠品系。進(jìn)一步通過(guò)尾靜脈注射GCV誘導(dǎo)轉(zhuǎn)基因小鼠肝臟損傷,以四氯化碳(carbontetrachloride,CC
2、l4)損傷小鼠為對(duì)照觀察疾病的進(jìn)程。通過(guò)血液的生化檢查,肝臟與腎臟等組織的病理形態(tài)學(xué)分析來(lái)研究轉(zhuǎn)基因小鼠的損傷效應(yīng)。本研究為肝病轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型的建立,為探討肝病的發(fā)病機(jī)制、病理生理過(guò)程、病理形態(tài)改變及藥物防治等研究開(kāi)拓了廣闊的前景?! ”狙芯客ㄟ^(guò)參閱文獻(xiàn),將查閱到的小鼠血清白蛋白基因調(diào)控元件功能區(qū)與GenBank小鼠基因組序列進(jìn)行同源比較,從而確定我們需要克隆的區(qū)域。利用巢式PCR擴(kuò)增Palb,利用可信度極高的TaqDNA聚合酶(Py
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