幽門螺旋桿菌在阿爾茨海默病發(fā)病中的作用和機制.pdf

1、阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s Disease, AD）是一種最常見的老年癡呆癥，目前全世界患病人數(shù)已超過3500萬。AD的特征性病理改變是腦內(nèi)神經(jīng)原纖維纏結(jié)（Neurofibrillary tangles, NFTs）的形成，老年斑（Senile plaques, SP）大量沉積和神經(jīng)元退變死亡。到目前為止，AD的病因尚未闡明。臨床上僅有5％的患者被發(fā)現(xiàn)存在相關(guān)致病基因，95％為散發(fā)性，提示AD的發(fā)生和環(huán)境因素密切相關(guān)。

2、　　幽門螺旋桿菌（Helicobacter pylori, H.pylori）為寄生在胃黏膜的革蘭氏陰性螺旋桿菌，全球大約有一半以上的人胃內(nèi)有 H.pylori感染，其中老年人群感染率尤高。大量臨床研究表明，H.pylori慢性感染不僅直接導致慢性胃炎、胃潰瘍并促進胃癌發(fā)生，也可引起或促進消化系統(tǒng)外疾病，如格林巴利綜合癥（脊神經(jīng)和周圍神經(jīng)的脫髓鞘疾?。⒏哐獕?、缺血性心臟病、腦缺血和中風，而這些疾患均為AD發(fā)生的危險因子。最近的一些臨床

3、流行病學調(diào)查研究為H.pylori感染與AD相關(guān)提供了更為直接的臨床證據(jù)。但是H.pylori感染到底通過何種途徑促進AD的發(fā)生，其機制尚無報道。
　　本研究中重點探討了H.pylori感染對tau蛋白磷酸化、Aβ40、Aβ42生成以及大鼠空間學習記憶的影響及其機制。主要結(jié)果如下：
　　第一部分幽門螺旋桿菌通過激活GSK-3β導致AD樣tau蛋白過度磷酸化
　　微管相關(guān)蛋白tau的過度磷酸化參與包括阿爾茨海默病在內(nèi)的許

4、多神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生。有報道認為幽門螺旋桿菌感染是AD發(fā)病的危險因素，但尚無直接的實驗證據(jù)。
　　目的:闡明H.pylori感染對tau蛋白磷酸化的影響及其機制。
　　材料和方法:實驗在整體和細胞水平進行。整體水平采用雄性SD大鼠，腹腔注射H.pylori濾液，280μl/只/天，給濾液濃度研究分組如下：DMEM/Opti-MEM混合培養(yǎng)基（體積比1：1）對照組、中濃度和高濃度H.pylori濾液注射組、對應濃度大腸桿菌（

5、Escherichia coli. E.coli）濾液注射對照組，依據(jù)濃度實驗結(jié)果確定給濾液時間點研究分組如下：DMEM/Opti-MEM混合培養(yǎng)基注射14天對照組、中濃度H.pylori濾液注射7天組、14天組和21天組，注射完畢后，麻醉取腦分離海馬，用免疫印跡檢測 tau蛋白AD相關(guān)位點磷酸化水平，用免疫組化檢測tau蛋白在神經(jīng)元內(nèi)的定位及小膠質(zhì)細胞活化情況，用酶聯(lián)免疫吸附檢測炎癥介質(zhì)IL-8和TNF-a的含量。細胞水平采用小鼠成神

6、經(jīng)瘤（N2a）細胞系，給濾液濃度研究分組如下：DMEM/Opti-MEM混合培養(yǎng)基作為對照，低、中、高濃度 H.pylori濾液孵育24小時組，對應濃度E.coli濾液孵育24小時組。依據(jù)濃度實驗結(jié)果給濾液時間點研究分組如下：DMEM/Opti-MEM混合培養(yǎng)基對照組，中濃度H.pylori濾液孵育6、24和36小時組。免疫印跡檢測tau磷酸化水平，tau相關(guān)蛋白激酶/磷酸酯酶活性；給予GSK-3抑制劑氯化鋰和 SB216763預處理N

7、2a細胞30分鐘，再用H.pylori濾液孵育24小時，免疫印跡檢測tau磷酸化水平。
　　結(jié)果:H.pylori濾液大鼠腹腔注射或孵育小鼠成神經(jīng)瘤細胞均導致AD相關(guān)tau蛋白磷酸化位點如Thr205、Thr231和Ser404明顯過度磷酸化，并伴有糖原合酶激酶-3β（glycogen synthase kinase-3β, GSK3β）的激活。給予 GSK-3抑制劑能有效逆轉(zhuǎn) H.pylori濾液導致的tau蛋白過度磷酸化。相同