Aurora-A高表達對腫瘤血管生成的影響及機制研究.pdf

1、目的：
　　1.構(gòu)建Aurora-A基因高表達的穩(wěn)定細胞系及對照細胞系；
　　2.檢測Aurora-A高表達對體內(nèi)腫瘤生長的影響；
　　3.檢測Aurora-A高表達對體內(nèi)外血管生成的影響；
　　4.檢測Aurora-A高表達對VEGFR-2表達的影響。
　　方法：
　　1.利用脂質(zhì)體介導(dǎo)將綠色熒光蛋白(greenfluorescentprotein，GFP)標記Aurora-A的真核表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人食

2、管癌細胞株KYSE150，通過Westernblot及免疫熒光鑒定Aurora-A高表達穩(wěn)定細胞系構(gòu)建是否成功；
　　2.將Aurora-A高表達細胞系及對照組細胞接種于裸鼠腋部皮下，構(gòu)建裸鼠荷瘤模型，觀察Aurora-A高表達對體內(nèi)腫瘤生長的影響；
　　3.采用小管形成及雞胚尿囊膜實驗分析體內(nèi)外Aurora-A高表達對血管生成的影響；采用免疫組化法研究Aurora-A高表達對裸鼠移植瘤中微血管密度(microvesseld

3、ensity,MVD)的影響；
　　4.采用Westernblot，研究Aurora-A高表達對食管鱗癌細胞中VEGFR-2及p-VEGFR-2表達的影響。
　　結(jié)果：
　　1.利用脂質(zhì)體介導(dǎo)的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入KYSE150細胞,Westernblot的灰度分析結(jié)果顯示，Aurora-A高表達組中Aurora-A蛋白的總表達量約為陰性對照組的2.5倍，提高了Aurora-A在細胞中的表達水平，成功構(gòu)建了Aurora-A高

4、表達的穩(wěn)定細胞系；免疫熒光結(jié)果顯示，GFP標記的Aurora-A主要定位于中心體及紡錘體上，Aurora-A異常高表達使得細胞中心體數(shù)目增多，與文獻報道一致，進一步說明Aurora-A高表達的穩(wěn)定細胞系構(gòu)建成功；
　　2.通過裸鼠腫瘤生長曲線發(fā)現(xiàn)，與陰性對照組相比，Aurora-A高表達組的腫瘤生長速度快，腫瘤體積較大，表明Aurora-A高表達可以促進體內(nèi)的腫瘤生長；
　　3.小管生成實驗表明，Aurora-A高表達組生成

5、的血管數(shù)量為26±1.79，明顯高于陰性對照組的血管數(shù)量13.6±1.31，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=4.238，P<0.01)，表明Aurora-A高表達可以促進體外血管生成；
　　4.雞胚尿囊膜實驗表明，與陰性對照組生成的血管數(shù)量23.33±1.76相比，Aurora-A高表達組生成的血管數(shù)量為38±2.31，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=5.047，P<0.01)，表明Aurora-A高表達可以促進體內(nèi)血管生成；
　　5.免疫

6、組化結(jié)果表明，Aurora-A高表達組中的MVD值為45±2.12，陰性對照組為30.2±1.65，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=4.795,P<0.01)，表明Aurora-A高表達可以促進裸鼠腫瘤中的微血管生成；
　　6.Westernblot結(jié)果表明與陰性對照組相比，Aurora-A高表達組中p-VEGFR-2的表達量增加約1.5倍，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=8.086,P<0.01)。而Aurora-A高表達組與陰性對照組中VE

7、GFR-2蛋白的表達無明顯差異，二者無統(tǒng)計學(xué)差異(t=0.472,，P>0.05)，表明Aurora-A高表達上調(diào)了p-VEGFR-2的表達水平，進一步說明，Aurora-A可以通過活化VEGFR-2促進血管生成。
　　結(jié)論：
　　1.成功構(gòu)建了Aurora-A高表達穩(wěn)定細胞系，并且Aurora-A高表達可以促進體內(nèi)腫瘤生長；
　　2.Aurora-A高表達可以促進食管鱗癌中的血管生成，其作用機制可能與活化VEGFR-