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文檔簡(jiǎn)介
1、乳源性活性肽是指乳蛋白經(jīng)不完全水解產(chǎn)生的具有其前體所沒有的特殊生理功能的肽類。它們具有調(diào)節(jié)人體生理機(jī)能和防病治病的功效,如抗菌、抗高血壓、抗凝血、降膽固醇、免疫調(diào)節(jié)等,在食品與藥品行業(yè)中應(yīng)用廣泛,具有很好的發(fā)展前景。目前乳源性肽主要通過酶法獲得,但是由于酶的專一性強(qiáng),使肽的種類和功能受到限制。而采用微生物發(fā)酵法制備乳源性活性肽,由于微生物酶系龐大并且種類多,可直接降解蛋白質(zhì)產(chǎn)生比較多的肽源,從中獲得有益活性肽的可能性較大,為進(jìn)一步研制更
2、多種類和功能的多肽奠定基礎(chǔ)。
本實(shí)驗(yàn)利用具有龐大蛋白酶系的米曲霉作為菌種,以牛乳為原料,進(jìn)行了米曲霉發(fā)酵牛乳產(chǎn)多肽的研究。通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn),確定米曲霉在牛乳中最適培養(yǎng)條件。在最適培養(yǎng)條件下,利用米曲霉水解牛乳,最終確定產(chǎn)多肽的較佳條件,并對(duì)所產(chǎn)多肽進(jìn)行了粗提和抑菌性實(shí)驗(yàn)研究。主要結(jié)論如下:
首先用牛乳培養(yǎng)米曲霉,考察溫度26℃~32℃、接種量3%~7%、裝液量20mL~50mL、轉(zhuǎn)速120r/min~
3、200r/min,通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn)確定米曲霉發(fā)酵牛乳的最佳培養(yǎng)條件為:溫度28℃、接種量7%、裝液量30mL/250mL、轉(zhuǎn)速180r/min、培養(yǎng)72h,在此培養(yǎng)條件下,米曲霉的菌絲干重可達(dá)2.61g/100mL。
其次進(jìn)行米曲霉水解牛乳蛋白產(chǎn)多肽的條件研究。①采用未經(jīng)處理的米曲霉酶液水解乳蛋白:考察加酶量3%~8%、水解溫度40℃~55℃、水解時(shí)間5h~60h;②采用超聲波破壁法制備酶液水解乳蛋白:考察超聲溫度
4、30℃~50℃、超聲功率100W~250W、超聲時(shí)間5min~25min、加酶量3%~7%;③采用高壓勻質(zhì)機(jī)破壁法制備酶液水解乳蛋白:考察壓強(qiáng)50MPa~150MPa、循環(huán)次數(shù)2次~4次、加酶量2%~6%、水解時(shí)間5h~45h;④采用滲透劑NaCl法制備酶液水解乳蛋白:考察NaCl濃度0.05mol/L~0.25mol/L、加酶量3%~7%、水解時(shí)間5h~50h。比較經(jīng)四種方法處理后的酶液水解乳蛋白所得水解液中肽含量,通過單因素和正交試
5、驗(yàn)確定最佳米曲霉酶液水解乳蛋白產(chǎn)肽條件。結(jié)果表明:采用高壓勻質(zhì)機(jī)破壁法,壓強(qiáng)75MPa、循環(huán)次數(shù)4次、加酶量5%、水解32h制得酶液水解乳蛋白所得肽含量最高,可達(dá)2.41mg/mL。
最后采用透析法對(duì)最佳條件下得到的水解液中的多肽進(jìn)行粗提,用截留分子量為3500Da和1000Da的透析袋進(jìn)行分級(jí)透析,考察不同分子量段的粗提肽對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌效果。結(jié)果表明:分子量在1000Da~3500Da的粗提肽,對(duì)大腸桿
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