魚露中章魚胺的分離及其生物合成的研究.pdf

1、章魚胺（Octopamine）是一種重要的生物胺和神經(jīng)介質(zhì)，起廣泛的生理作用，有調(diào)節(jié)代謝與能量平衡的功效，是目前唯一商品化的防治肥胖癥與糖尿病的β3-腎上腺素能受體激動劑。枳實和魚露是天然章魚胺的主要來源，但枳實中章魚胺的含量僅為0．01～0．03％。而魚露中相對豐富的章魚胺的含量，使從魚露中提取章魚胺開發(fā)健康產(chǎn)品成為可能。本論文研究之一是從魚露中提取章魚胺的有效方法并使處理過的魚露有望成為適合更廣大人群的新的調(diào)味料，為進一步改進魚露的

2、生產(chǎn)工藝與開發(fā)利用魚露打下了基礎(chǔ)。研究之二是模擬魚露中章魚胺的生成路徑，以酪胺為前體化合物，經(jīng)細(xì)胞色素P450酶系的羥化作用，生物合成章魚胺，從而為章魚胺的工業(yè)化生產(chǎn)提供實驗依據(jù)。 1．魚露中章魚胺的分離 魚露含鹽量達27％，章魚胺是以有機酸鹽的形式存在于魚露。實驗初期建立起快速準(zhǔn)確測定章魚胺的含量方法-HPLC方法。通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以章魚胺的進樣濃度（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，其回歸方程為：Y=286

3、8．4X+60．619，r=0．9991．結(jié)果表明：章魚胺在0．0057-50μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。接著采用靜態(tài)吸附和動態(tài)吸附相結(jié)合的方法，綜合考慮吸附量、解吸率等因素，研究樹脂分離提取魚露中章魚胺的吸附性能和洗脫參數(shù)。結(jié)果表明：H103大孔吸附樹脂對魚露中章魚胺有較好的吸附分離效果，該樹脂對魚露中章魚胺的靜態(tài)飽和吸附量達2．925mg·g-1（干樹脂），30％的乙醇為最佳洗脫劑，洗脫率達98．04％。H103大孔吸附樹

4、脂處理后，能有效分離章魚胺，改善了魚露的風(fēng)味，適用于從魚露中提取章魚胺的工業(yè)應(yīng)用。 2．章魚胺的生物合成 魚露在漫長的發(fā)酵過程中，細(xì)胞色素P450酶系（cytochrome P450s，CYP450）對章魚胺的生物合成起了關(guān)鍵的作用。參照魚露中章魚胺的生成路徑，以酪胺為前體化合物，經(jīng)細(xì)胞色素P450酶系的催化羥化，轉(zhuǎn)化為章魚胺。細(xì)胞色素P450酶系催化作用的重要場所——肝臟，本論文采用改良的Omura法制備新鮮魚肝制劑，

5、減少肝臟里CYP450的失活率。CYP450的來源設(shè)計了三種方案，一是新鮮魚肝經(jīng)均質(zhì)后的肝勻漿，二是肝勻漿再經(jīng)高速離心和過濾后而得的S-9部分，第三是在S-9中再添加維生素C。三種方案后催化羥化產(chǎn)物經(jīng)HPLC進行檢測分析（章魚胺為內(nèi)標(biāo)），以轉(zhuǎn)化后章魚胺的峰面積情況為指標(biāo)，優(yōu)化出最佳生物合成方案。結(jié)果表明：酪胺用肝勻漿和S-9生物轉(zhuǎn)化章魚胺后，HPLC圖譜顯示章魚胺的峰面積很小，有并肩峰，且雜峰干擾大。隨著轉(zhuǎn)化時間延長，三小時后產(chǎn)物比一小

6、時更多，且章魚胺的峰面積減少，有分解趨勢。S-9與維生素C耦合作用一小時后，HPLC圖譜顯示酪胺轉(zhuǎn)化成章魚胺的峰面積最多，無并肩峰，雜峰干擾很小，生物合成效果最好。三小時后章魚胺的峰面積減少，也有分解的趨勢，且其他產(chǎn)物增多，有雜峰干擾，這對今后分離造成困難。 由于國內(nèi)目前尚未有β3-腎上腺素能受體激動劑——章魚胺的研究報告或產(chǎn)品，本課題很有可能是第一個國內(nèi)有關(guān)天然β3-腎上腺素能受體激動劑的生產(chǎn)和應(yīng)用研究的課題。魚露在中國的東南